HPLC和经典LC、GC比较与高效液相色谱法.ppt

HPLC与经典LC、GC的比较和高效液相色谱法;1. 基本概念与特点 2. HPLC与经典LC、GC的比较 3. HPLC仪器结构 4. 液相色谱的固定相与流动相 5. HPLC;一、概述; 1．高效液相色谱法与经典液相色谱法 ; 1．高效液相色谱法与经典液相色谱法 ; （l）气相色谱法分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物，它们仅占有机物总数的20％．对于占有机物总数近80％的那些高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质，目前主要采用高效液相色谱法进行分离和分析． ; (2)气相色谱采用流动相是惰性气体，它对组分没有相互作用力，仅起运载作用． 而高效液相色谱法中流动相可选用不同极性的液体，选择余地大，它对组分可产生一定亲和力，并参与固定相对组分作用的选择竞争．因此，流动相对分离起很大作用，相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数，这为选择最佳分离条件提供了极大方便．; 　(3)气相色谱一般都在较高温度下进行的，而高效液相色谱法则经常可在室温条件下工作． 总之，高效液相色谱法是吸取了气相色谱与经典液相色谱优点，并用现代化手段加以改进，因此得到迅猛的发展．; 2．高效液相色谱法与气相色谱法 ;液相色谱仪器 high performance liquid chromatograph;液相色谱仪（2）;液相色谱仪（3）;液相色谱仪（4）;二、高效液相色谱仪;高效液相色谱结构及流程图;1．高压输液系统 由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动相阻力很大，为使流动相较快流动，必须配备有高压输液系统．它是高效液相色谱仪最重要的部件，一般由储液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组成，其中高压输液泵是核心部件． 常用的输液泵为机械往复式恒流泵．;泵工作示意图; 2.进样系统 高效液相色谱柱比气相色谱柱短得多（约5～30cm），所以柱外展宽（又称柱外效应）较突出．柱外展宽是指色谱柱外的因素所引起的峰展宽. 进样系统是引起柱前展宽的主要因素，因此高效液相色谱法中对进样技术要求较严． 进样方式：注射器 ;阀 ;旋转式六通阀工作原理;3. 分离系统——色谱柱;4.检测系统 ;1.紫外-可见光检测器;???缺点 　①只能检测有紫外吸收的样品； 　②检测波长＞流动相的截止波长。 ⑸波长选择 　①选择λmax作检测波长，以得到较高的灵敏度； 　②检测波长＞流动相的截止波长。 ⑹紫外检测器的类型 　①固定波长型(已淘汰)； 　②可变波长型(最常用)； 　③二极管阵列检测器(必威体育精装版型)。;（2）荧光检测器（fluorescence detector）;(3)示差折光检测器（differential refractive index detector）;HPLC与经典LC、GC的比较和高效液相色谱法;三. 液相色谱的固定相与流动相;高效液相色谱固定相按孔隙深度分类，可分为表面多孔型和全多孔型两大类。;化学键合固定相;化学键合固定相的特点;2.液相色谱的流动相;(2)流动相类别;(3) 流动相选择;(4)选择流动相时应注意的几个问题;流动相应具备的条件:;四.高效液相色谱法的主要类型;;;;;*;;五. 液相色谱分离类型的选择;(2)根据溶解度选择 如：样品可溶于水并属于能离解物质，以采用离子交换色谱为佳； 如：样品可溶于烃类（如苯或异辛烷），则可采用液--固吸附色谱；;（3）根据分子结构选择 例如，酸、碱化合物宜用离子交换色谱； 脂肪族或芳香族宜用液--液分配色谱或液--固吸附色谱； 异构体用液--固吸附色谱； 同系物用液--液分配色谱． 等等;分离类型选择总结，P370;高效液相色谱仪应用实例 ;HPLC的应用 ;2. 稠环芳烃的分析;1.从分离原理、仪器构造及应用范围上简要比较气相色谱及液相色谱的异同点。;4. 液相色谱有几种类型?它们的保留机理是什么? 在这些类型的应用中,最适宜分离的物质是什么?