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【学习目标】 1、 掌握动物细胞融合与植物体细胞杂交的 区别和联系。 2、 简述动物细胞融合和单克隆抗体制备的过程。 3、 了解单克隆抗体在医学实践中的应用, 并能说出应用实例。 【学习重点】 1、动物细胞融合的过程 2、单克隆抗体的制备过程 【学习难点】 单克隆抗体的制备过程 病原体 吞噬细胞 (摄取和处理) T细胞 B细胞 (识别) 传递抗原 传递抗原 暴露出特定的抗原 刺激 产生淋巴因子 增殖和分化 记忆B细胞 浆细胞 抗体 一个天然抗原物质可有多种和多个决定簇。教材中所说的抗原分子刺激淋巴细胞,说的也就是抗原决定簇刺激B淋巴细胞,使其分裂分化出特异性的效应B细胞,分泌特异性抗体。 动物细胞融合技术 B 、BB 、B瘤 、瘤瘤 、瘤 只有杂种细胞才能活 动物细胞培养 3.单克隆抗体制备过程 获得产生相应抗体的B淋巴细胞 1. 动物特异性免疫 2.分离B淋巴细胞(B);找到骨髓瘤细胞(G)。注意B淋巴细胞是一个系列。(B1,B2,B3,---Bn) 3.细胞融合——三种融合方式:(BB;BG;GG) 4.第一次筛选:在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞(只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列:如B1G,B2G---BnG。而BB,GG则不能存活。) 5.第二次筛选:在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列 ,每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞,并进行“单一抗体检测”,“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。 6.选择所需要的杂交瘤克隆细胞群,体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。 7.提取单克隆抗体。 单抗的制备过程要点:
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