水中细菌总数的测定 实验作业指导书.docVIP

细菌总数的测定 方法依据 水质 细菌总数的测定 适用范围 本细菌总数测定是测定水中需氧量、兼性厌氧和异养菌密度的方法。 测定原理 细菌能以单独个体、成双成对、链状、成簇等形式存在，而且没有任何单独一种培养基能满足一个水样中所有细菌的生理要求。所以，由此法所得的菌落可能要低于真正存在的活细菌的总数。此方法主要作为判定饮用水、水源水、地表水等污染程度的标志。 培养基的制备 营养琼脂培养基。 营养琼脂培养基 蛋白胨 10g 牛肉浸膏 3g 氯化钠 5g 琼脂 15～20g 蒸馏水 1000ml 将上述成分混合后，调节pH为7.4～7.6，过去除去沉淀，分装于玻璃容器中，经121℃高压蒸汽灭菌15min，贮存与暗处备用。 水样的稀释 5.1 实稀释度要选择适宜，以期在平皿上的菌落总数介于30～300之间。例如，如果认为直接水样的标准平皿计数可高达3000，就应该将水样稀释到1：100后，在进行平皿计数。 大多数饮用水水样，未经稀释直接接种1ml，所得的菌落总数可适用于计数。? 5.2水样的稀释方法： ?将水样用力振摇20～25次，使可能存在的细菌凝团成分散状 ?以无菌操作方法吸取10ml充分混匀的水样，注入盛有90ml灭菌水的三角瓶中（可放入适量的玻璃珠）混匀成1：10稀释液。 ?稀释1：10的稀释液1ml注入盛有9ml灭菌水的试管中，混匀成1：100稀释液。按同样方法稀释成1：1000、1：10000稀释液。 注意：吸取不同浓度的稀释液时，必须更换吸收管。 操作方法 ?以无菌操作方法用1ml灭菌吸管吸取充分混匀的水样或2～3个适宜浓度的稀释水样1ml，注入灭菌平皿中，倾注约15ml已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每个水样应倾注俩个平皿，每次检验时，另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。 ?待琼脂冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于37℃恒温箱内培养24h，进行菌落计数。 菌落计数 培养之后，立即进行平皿菌落计数。如果计数必须暂缓进行，平皿须存放于5～10℃冰箱内，且不得超过24h.但是不可以使这种做法成为常规的操作方式。 作平皿菌落计数时，可用菌落计数器或放大镜检查，以防遗漏，在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数。在求同稀释度的平均数时，如果其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应余一半中菌落分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘以2代表全皿菌落数，然后再求该稀释度的平均菌落数。如果由于稀释等过程中有杂菌污染，或者对照平皿显示出培养基或其他材料有杂菌，以致平皿无法计数，则报告“实验事故”。 对那些看来相似，距离相近但却不相接触的菌落，只要它们的距离不小于最小菌落的直径，便应一一予以计数。那些紧密接触而外观相异的菌落，应该一一予以计数。 分析步骤 8.1 校首先选取平均菌落数在30～300之间的平皿，作为菌落总数测定的范围。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数（见表中例1）。???? 8.2 若有两个稀释度，其平均菌落数均在30～300个之间，则应求出 两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数，若大于2则报告其中较小的菌落数（见表中例2及例3）。?? 8.3若所有稀释度的平均菌落数均大于300个，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表中例4）。?? 8.4若所有稀释度的平均菌落数均少于30个，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表中例5）。?? 8.5若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300个之间，其中一个稀释度大于300个，而相邻的另一稀释度小于30个时，则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表中例6）。???? 8.6若所有的稀释度均无菌生长，报告数为每克或每毫升小于10个。?? 8.7菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告之，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，应以四舍五入法计算。为了缩短数字后面零的个数，可用10的指数来表示（见下表报告方式栏）。在报告菌落数为“不可计”时，应注明样品的稀释度。??