表达载体的构建方法及步骤.pptx

表达载体的构建方法及步骤;2;3;4;5;（2）X 基因慢病毒载体的构建 X 基因基因由Transheep 全基因合成，构建于载体PUC57 中。 PUC57-X 基因 EcoRI/BamHI 酶切结果：;处理好的目的片段与载体连接反应体系： 6ul PCR 酶切回收片段（约 50ng/ul） 1ul 酶切好的载体（约 50ng/ul） 2ul ligase buffer 1ul T4ligase 10ul H2O 以上连接液在 16℃过夜。 转化 (感受态细胞: DH5a),具体步骤见附录转化部分。 抗性: Amp; 37℃，培养过夜 转化后X 基因分别平板挑菌, 37℃ 250 转/分钟摇菌 14 小时，PCR 鉴定后，将 阳性菌液送上海权阳生物技术有限公司测序。 X 基因慢病毒载体单克隆菌落PCR 鉴定（使用载体通用引物,PCR 条带大小应比 实际大 200bp 左右）：;