K210 食品微生物检验技术、K209 农产品微生物检验技术 W7203 API试剂盒法、W7203 API试剂盒法 W7203微生物快速检验方法-API试剂条-4-微教材.docx

PAGE \* Arabic 3 / NUMPAGES \* Arabic 3 《农产品/食品微生物检验》课程-微教材 微课名称 微生物快速检验方法-API试剂条 关键词 微生物；快速检验；API试剂条 微课类型 讲授型 微课形式 PPT动画式 画中画式 教学设计模式 讲授法 教学目标 了解API试剂条及其特点与操作注意事项 熟练使用API试剂条进行检验操作 教学内容 知识点 技能点 API试剂条简介 API试剂条特点 API试剂条操作步骤 使用API试剂条进行检验操作 知识讲解 1、API试纸条简介 法国梅里埃的API试纸条是一类特殊的可用于快速生化鉴定的试剂盒，API鉴定系统是由法国生物-梅里埃公司生产的细菌数值分类分析鉴定系统.该系统品种齐全，包括的范围广，鉴定的能力强，数据库在不断地完善和补充，目前约有 10 0 0种生化反应，可鉴定的细菌大于 5 5 0种。比较常用 API 20E、20NE等。 以常用的 API 20E为例，完整试剂条包括： API 20E试条主体部分：每个小孔载有底物；用于保持潮湿环境的培养盒；用于调菌液悬浮液；用于覆盖在指定小孔进行厌氧培养的石腊油；加进指定的生化孔内的附加试剂以及用于挑菌落，混匀及接种的接种管。 在微生物的鉴定过程中可能会遇到各种各样的困难，常见的困难包括微生物复杂的分类及进化；由于微生物的生物特征与代谢，在检验过程中设计多种多样的生化项目，在工业应用中微生物容易出现变异，很多微生物检验的结果处理及计算比较麻烦。那么在微生物质控检验中有需要怎样的检验方法呢，在质控检验的方法需要有广泛的鉴定范围、可靠的结果，操作简便，出检验报告快速，以及较低的成本。而法国梅里埃API试剂条，可以帮助克服这些困难，满足这些需求。满足上述要求的API系统，不仅仅包括含有各生化小管的多种试剂条，还包括各相应的数据库，允许所有生化结果同一时间一并阅读 2、API试纸条特点 API试剂条含有各生化小管的主体部分可以说是既可靠又极具创意。API试剂条结果的判读，采用数码鉴定法，将每3个生化反应分成一组，每组中结果分别标记为1、2、4 ，将每组阳性数值相加，得到一个编码。获得编码后可根据鉴定检索手册，从中查找数值编码，也可根据APIweb TMM或ATBTM new鉴定软件得到鉴定结果。 API结果判读的原理为各生化鉴定结果组合与资料库中典型条目做比对，经计算，得出鉴定百分比，及鉴定的机会率，指示出不同菌种的比较以及T值，指示出结果在同一个菌类的相似程度。 结果鉴定百分率 %ID，即细菌鉴定的可能性，与数据库中各个项的接近程度来确认未知菌是否属于某一个分类单位（科，属，种）。如待检菌X，经计算后为A菌的可能性为0.1%，为B菌的可能性为99.8%，为C菌的可能性为0.1% 典型性参数，T index，T值，为待检菌的分类单位被确定以后，表示其生化反应结果与该菌最典型生化谱的接近程度。 API试剂条的结果判读，每一个鉴定结果都会附有相应的评语，给出鉴定结果的鉴定百分率和T参数以及鉴定结果的可信性，不同范围的鉴定百分率与T参数组合，可靠性判断为：极好的鉴定、非常好的鉴定、好的鉴定、可接受的鉴定以及不可接受的鉴定。 3、API试纸条操作步骤 分离单个菌落：挑单个可疑菌落，尽量避免使用高度选择性培养基； 调制菌液：悬浮液 (容量: 5 mL)，调制菌液，0.5麦氏； 将 5 mL 无菌水放进培养盒里； 将试条放进培养盒内； 将菌液接种到小管或小管及小杯(CIT、VP和 GEL)； 利用石腊油覆盖指定的生化孔 (有划线的孔)ADH、ODC、H2S、URE）； 把培养盖盖上； 把试条放进孵育箱内，利用指定温度及时间，如：API 20 E : 35-37 oC，18-24 h； 进行氧化酶实验，用一次性接种环挑取至单菌落氧化酶试剂中，判断； 按操作说明书规定，将附加试剂加进适当小孔内； 根据说明书判定，记录结果。 拓展阅读 医学论坛网：食品中志贺氏菌的检测能力验证结果及分析：/detail/1068493.html 食品微生物检验论坛： /forum-1-1.html