脂质体2000说明书.docVIP

脂质体2000 描述 脂质体2000是专门用于将核酸转染进入真核细胞的一种形式，我们提供下列的建议： 在多种细胞和培养板中都有很高的转染效率。在网上列出的细胞类型中都获得了较高的转染效率。 核酸-脂质体2000的复合物可以直接加入到细胞培养液中，无论是有血清还是无血清的情况。 转染之后不用移除复合物或者更换培养液，但是复合物应在转染后4-6h移除。 转染的一些重要指导 DNA转染使用page3 我们建议使用Opti-MEM I reduced serum 培养基来稀释脂质体2000和核酸。 转染时不要向培养基中加入抗生素。 在实验过程中要保持一样的条件 DNA转染 使用下列方法在24孔板内转染DNA进入哺乳动物细胞。对于其他的板子，可以参考page4.所有的数量和体积都是基于一个孔的剂量。准备复合物使DNA（ug）：脂质体（ul）的比例为1:2到1:3。转染时细胞密度较高可以获得高的效率，高的表达水平，以及使毒性降低。条件的选择很重要。 贴壁细胞：在转染前一天，向24孔板内接种0.5-2*105个细胞，使得细胞在转染时融合率达到90-95%。切记使用不含抗生素的培养基。 对于每一个转染样品，按照如下方法准备复合物： 使用无血清的培养基将DNA稀释为50ul，温和混匀。 使用前混匀脂质体2000，然后用培养基将一定量的脂质体2000稀释为50ul。室温孵育5min。 进行到c时间不超过25min C．5min的孵育后，混合稀释的DNA和稀释的脂质体2000（总体积为100ul）。温和混匀，室温孵育20min（溶液呈现云雾状）。 混合物在室温可稳定存在6h。 向含有细胞和培养液的板子中每孔加入100ul的复合物，通过敲打板子和来回晃动使其混合均匀。 细胞孵育18-48h后可检测转染情况。培养液可在转染4-6h后更换。 对稳定的细胞系：传代细胞在转染后以1:10的比例加入新鲜的培养液。第二天加入选择培养基。 优化转染 为了获得高的转染效率和低毒性，通过调整细胞浓度和DNA:脂质体2000的比例来优化转染条件。确保细胞90%的融合，以及DNA(ug)：脂质体（ul）比例在1:0.5到1:5。 转染条件的浮动 转染到不同类型的培养板中，脂质体2000的，核酸的量，细胞数以及合适的培养基量，都在下表中显示。在96孔板中，建议总体积到50ul 培养容器 共同试剂 DNA转染 孔内液体体积 稀释液体积 DNA 脂质体200 96孔板 100ul 2*25ul 0.2ug 0.5ul 24孔板 500ul 2*50ul 0.8ug 2.0ul 6孔板 2ml 2*250ul 4.0ug 10ul 60mm 5ml 2*0.5ml 8.0ug 20ul