输血科配制自备试剂的标准操作规程.docVIP

输血科配制自备试剂的标准操作规程 1、目的 本文件规定了输血科自备试剂的相关操作程序，以确保输血科试验的质量控制，使检验结果更准确。 2、适用范围 本文件适用于医院输血科ABO血型、RhD血型、盐水交叉配血、凝聚胺交叉配血、柱凝胶法血型鉴定及交叉配血，新生儿溶血筛查试验，抗人球蛋白试验等试验项目检验过程的质量控制管理。 3、职责 输血科技术人员负责本实验室所用自备试剂的配制与确认。 4、操作规程 4.1 0.1mol/L2-巯基乙醇（2-Me）的配制 ①材料：2-Me，PH7.4PBS ②配制方法：称取2-Me80mg，加入PH7.4PBS 10ml，放4℃冰箱可以保存4周。 ③适用范围：该试剂为硫氢化合物，能分裂19S的IgM抗体成为7S单位。含IgM抗体的血清经2-Me溶液处理后，IgM抗体重链之间的二硫键被打开，不能再凝集盐水介质中的对应红细胞，用于含IgG和IgM混合抗体血清中IgG的检测；鉴定抗体的免疫球蛋白类别；消除被IgM抗体包被的红细胞的自身聚集。 4.2磷酸盐缓冲液（PBS）配制 ①材料：KH2PO4(分析纯)，Na2HPO4(分析纯)，去离子蒸馏水。 ②配制方法 溶液A：1/15mol/L KH2PO4溶液：取KH2PO49.08g（若试剂含结晶水请计算后加入相应重量），加少量蒸馏水溶解后，移至1000ml容量瓶稀释至刻度，调PH至5.0。 溶液B：1/15mol/L Na2HPO4溶液：取Na2HPO49.47g（若试剂含结晶水请计算后加入相应重量），加少量蒸馏水溶解后，移至1000ml容量瓶稀释至刻度，调PH至9.0。 取两种溶液以适当比例混合，配制符合要求的PH工作缓冲液，血清学试验常用PBS PH如下表： PH 溶液A（ml） 溶液B（ml） 5.4 96.0 4.0 5.5 94.0 6.0 7.2 28.0 72.0 7.3 23.2 76.8 7.4 19.2 80.8 7.7 10.6 89.4 7.8 8.5 91.5 7.9 6.8 93.2 8.0 5.8 94.7 8.1 4.2 95.8 8.2 3.0 97.0 使用之前要检查工作液的PH，若不符合要求，加少量酸性溶液A或碱性溶液B矫正。 ③适用范围：广泛用于血型血清学试验、试剂稀释等。 4.3红细胞悬液的制备 ① 分别采取已知正常A、B、O三种血型的红细胞，以盐水洗涤3次以压积红细胞配成不同浓度的红细胞悬液（见表）。 红细胞悬液的配制 悬液浓度（%） 压积红细胞（滴） 盐水（滴） 2 5 10 20 1 1 1 1 2 ml（40） 0.8 ml（16） 0.4 ml（8） 0.2 ml（4） ② 为了防止红细胞悬液敏感性不一致。可随机采取3个或3 个以上的健康成人血液，按A、B、O型分别混合后，按上述方法制备。如用于不规则抗体筛查，则至少应选5人以上的红细胞混合。 ③参照定型血清质控标准，进行质量检查合格，置4℃冰箱保存备用。如抗原性降低或长菌、溶血则应弃之。配置者应做好记录、登记。 ④如将红细胞保存，应严格注意无菌技术，以ACD保存液按4:1抗凝。可保存三周。临时取出一部分，洗涤后配成所需浓度使用。 ⑤2%的红细胞悬液一般用于滴定抗体效价，5%的红细胞悬液常用于血型鉴定和间接抗人球蛋白实验，10%的红细胞悬液用于测定抗体亲和力。 4.4生理盐水（NS）配制 ①材料:NaCl（分析纯），去离子蒸馏水。 ②配制方法：称取NaCl8.5g，加蒸馏水至1000ml，充分混匀。 ③适用范围：普通血清学试验，稀释试剂，配制等渗溶液等。 四、相关文件