畜产品检测技术 第一法 定性检验 克罗诺杆菌属定性检验.docx

电子教材 PAGE 6 《畜产品检测技术》电子教材 克罗诺杆菌属定性检验 一、方法来源 此方法来源于国家标准GB4789.40-2016，该标准规定了食品中克罗诺杆菌属(Cronobacter)的检验方法，适用于婴幼儿配方食品、乳和乳制品及其原料中克罗诺杆菌属的检验。 二、设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 1.恒温培养箱 25℃±1℃，36℃±1℃，44℃±0.5℃。 2.冰箱 2℃~5℃。 3.恒温水浴箱 44℃±0.5℃。 4.天平 感量0.1g。 5.均质器。 6.振荡器。 7.无菌吸管 1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。 8.无菌锥形瓶 容量100mL、200mL、2000mL。 9.无菌培养皿 直径90mm。 10.pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。 11.全自动微生物生化鉴定系统。 三、培养基和试剂 1.缓冲蛋白胨水(buffer peptone water，BPW) 1）成分 蛋白胨10.0g，氯化钠5.0g，磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O) 9.0g，磷酸二氢钾1.5g，蒸馏水1000mL。 2）制法 加热搅拌至溶解，调节pH 至7.2±0.2，121℃高压灭菌15min。 2.改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素(modified lauryl sulfate tryptose broth-vancomycin medium，mLST-Vm) 1）改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨(mLST)肉汤 ①成分：氯化钠34.0g，胰蛋白胨20.0g，乳糖5.0g，磷酸二氢钾2.75g，磷酸氢二钾2.75g，十二烷基硫酸钠0.1g，蒸馏水1000mL。 ②制法：加热搅拌至溶解，调节pH 至6.8±0.2。分装每管10mL，121℃高压灭菌15min。 2）万古霉素溶液 ①成分：万古霉素10.0mg，蒸馏水10.0mL。 ②制法：10.0mg万古霉素溶解于10.0mL蒸馏水，过滤除菌。万古霉素溶液可以在0℃~5℃保存15d。 3）改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素(Modified lauryl sulfate tryptose broth-vancomycin medium,，mLST-Vm) 每10mLmLST加入万古霉素溶液0.1mL，混合液中万古霉素的终浓度为10μg/mL，mLST-Vm 必须在24h之内使用。 3.克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）显色培养基。 4.胰蛋白胨大豆琼脂(trypticase soy agar，TSA) 1）成分 胰蛋白胨15.0g，植物蛋白胨5.0g，氯化钠5.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1000mL。 2）制法 加热搅拌至溶解，煮沸1min，调节pH 至7.3±0.2，121℃高压15min。 5.克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）生化鉴定试剂盒。 6.氧化酶试剂 1）成分 N ,N ,N,N-四甲基对苯二胺盐酸盐1.0g，蒸馏水100mL。 2）制法 少量新鲜配制，于冰箱内避光保存，在7d之内使用。 3）试验方法 用玻璃棒或一次性接种针挑取单个特征性菌落，涂布在氧化酶试剂湿润的滤纸平板上。如果滤纸在10s中之内未变为紫红色、紫色或深蓝色，则为氧化酶试验阴性，否则即为氧化酶实验阳性。注意实验中切勿使用镍/铬材料。 7.L-赖氨酸脱羧酶培养基 1）成分 L-赖氨酸盐酸盐(L-lysine monohydrochloride) 5.0g，酵母浸膏3.0g，葡萄糖1.0g，溴甲酚紫0.015g，蒸馏水1000mL。 2）制法 将各成分加热溶解，必要时调节pH 至6.8±0.2。每管分装5mL，121℃高压15min。 3）实验方法 挑取培养物接种于L-赖氨酸脱羧酶培养基，刚好在液体培养基的液面下。30℃±1℃培养24h±2h，观察结果。L-赖氨酸脱羧酶试验阳性者，培养基呈紫色，阴性者为黄色，空白对照管为紫色。 8.L-鸟氨酸脱羧酶培养基 1）成分 L-鸟氨酸盐酸盐(L-ornithine monohydrochloride) 5.0g，酵母浸膏3.0g，葡萄糖1.0g，溴甲酚紫0.015g，蒸馏水1000mL。 2）制法 将各成分加热溶解，必要时调节pH至6.8±0.2。每管分装5mL，121℃高压15min。 3）实验方法 挑取培养物接种于L-鸟氨酸脱羧酶培养基，刚好在液体培养基的液面下。30℃±1℃培养24h±2h，观察结果。L-鸟氨酸脱羧酶试验阳性者，培养基呈紫色，阴性者为黄色。 9.L-精氨酸双水解酶培养基 1）成分 L-精氨酸盐酸盐(L-arginine monohydrochloride) 5.0g，酵母