临床输血检验技术、社会服务模块 病原学标志物的检测、技术文档 PCR扩增、结果分析和报告发放标准操作规程.doc

襄阳市中心血站 操作规程 版本：6 修改状态：0 文件编号：XBC/SOP-SL-38 生效日期：2016年1月1日 文件名称：PCR扩增、结果分析和报告发放标准操作 规程 第 PAGE 6 页 共6页 受控状态：受控 控制编号： PCR扩增、结果分析和报告发放标准操作规程 1 目的 规范PCR扩增、结果分析和核酸报告签发。 2 适用范围 适用于ABI7500型荧光定量PCR仪核酸扩增，结果分析及检测报告的签发。 3 职责 3.1 扩增分析人员负责PCR扩增条件的设置、结果分析和扩增文件的保存。 3.2 报告签发人员负责核酸检测报告的签发。 4 实施程序 4.1 原理 4.1.1 PCR扩增检测：PCR扩增检测采用TaqMan荧光探针标定技术。人类免疫缺陷病毒、丙型肝炎病毒、乙型肝炎病毒核酸扩增分别采用不同荧光染料标记的探针，故可对提取的样本和内对照模板同时进行HBV（DNA）、HCV（RNA）、HIV1（RNA）检测。在反转录酶的作用下HCV RNA/HIV1 RNA/内对照RNA反转录成cDNA，再与HBV DNA/内对照DNA一同作为模板在TaqDNA聚合酶的作用下扩增病毒核酸的保守区域和内对照特定区域。TaqDNA聚合酶5’—3’ 4 结果判定：实时荧光定量PCR仪软件可进行结果观察并给出测定结果，如测定样品为某项病毒核酸检测阴性或阳性，测定结果有效或无效，测定样品和内对照的CT值。 4.2 PCR扩增按《ABI7500荧光定量PCR仪标准操作规程》操作。 4.3 结果分析 4.3 判定规则对照表 表1 阳性对照、阴性对照、内对照结果判定规则 分析项目 内对照 HBV DNA HCV RNA HIV-1 RNA 备注 检测荧光 HEX TAMRA FAM ROX CY5 / 阴性对照 + + - - - 否则重测 阳性对照 / / + + + 否则重测 表2 检测样本结果判定规则 分析项目 内对照 HBV DNA HCV RNA HIV-1 RNA 结果判定 检测荧光 HEX TAMRA FAM ROX 检测荧光 检测样本 + + - - - HBV DNA/ HCV RNA/ HIV-1 RNA阴性 / / + / / HBV DNA 阳性 / / / + / HCV RNA 阳性 / / / / + HIV-1 RNA 阳性 - - - - - 所有结果重新测定 - / - / / HBV DNA结果重新测定 / - / - - HCV RNA或HIV-1 结果重新测定 1.”/”表示不考虑 2.FAM/ROX/CY5荧光层“-”表示Ct45 or No Ct;”+”表示Ct≤45 3.HEX/TAMRA荧光层 “-”表示Ct40 or No Ct;”+”表示Ct≤40 4.3 实验结果的分析与判断 4.3.2 实验有效性的判定 参照表1、表2规则对每孔结果的有效性及阴阳性进行判断，当阴阳性对照与外部质控品（质控品达到预期结果）同时有效时，整批实验有效；否则整批实验无效，需重做。 4.3.2 结论的判定 a.采用混检（八混一）模式进行核酸检测，当混检结果呈非反应性（-）时，该混检孔内的标本均判为合格标本。 b.当混检结果某一项或多项呈反应性（+）时，混检孔内的所有标本均为待查标本，须进行拆分单样本检测。 c.当拆分检测呈非反应性（-）时，则该标本为合格标本；拆分单样本检测某一项或多项呈反应性（+）时，该样本判为不合格。 4.4 报告发放 4.4 将加样文件（ \\Star\Info_part）和结果文件（\\Abi7500-2\实验数据）分别剪切粘贴至报告发放电脑“数据盘(E)”中的“star传入数据”和“7500传入数据”文件夹中并复制备份到以当天日期为名的文件夹。 将当天扩增文件（\\数据文件）复制粘贴到“7500传入数据”文件夹中并复制备份到以当天日期为名的文件夹。 4.4.2 双击桌面软件图标，点击文件，注册，输入用户名和口令进入Auslis 系统。点击核酸检测，样本条码/结果关联追踪，在其界面点击创建器皿，输入器皿条码（即PCR板号），点击开始，导入结果，即可完成加样文件和结果文件在整合。在生成在报表界面点击打印即可。详细操作见《AusLIS血液 筛查实验室信息系统操作规程》。 4.4 双击桌面图标，输入用户名和密码，点击确定，进入SHINOW9.0系统操作界面，如图 在工具栏中点击核酸设备进入下图界面，选择使用的扩增仪、实验操作者和实验时间，点击查询，显示实验结果文件点击浏览，查看详细实验结果，点击确认接收，将实验结果接收入SHINOW9.0系统，系统自动跳转到下一个界面。 核对实验结果数量与实际实验结果数量是否相同，检查实验项目、实验方法有无错误，确认无误后点击