五羟色胺酸（5-HTP）通过MAPK_BCL-3调控奶山羊乳腺上皮细胞增殖的研究.pdf

摘要 摘要 乳腺上皮细胞的增殖与凋亡调控在促进乳腺发育、泌乳、启动哺乳等方面发挥着 重要作用。乳腺上皮细胞是乳腺内唯一合成并分泌乳蛋白的细胞，其数量与分泌活性 对哺乳动物的产奶量具有决定性作用。5-羟色胺 （5-HT）是一种在乳腺腺体内合成， 能以自分泌 旁分泌形式对乳腺钙稳态、乳成分以及泌乳量进行调节的单胺类物质。本- 研究中使用的5-羟色胺酸 （5-HTP）是5-HT 合成的前体物质，具有化学结构更为稳定 的特点。为提高奶山羊体循环中的5-HT 浓度，课题组曾向围产期奶山羊静脉注射 0.8mg/kg 的5-HTP（对照组注射等量生理盐水），采集血样进行转录组测序以及KEGG 富集分析发现：注射5-HTP 后MAPK/ERK 信号通路调控的下游基因表达变化显著， 据文献报道MAPK/ERK 信号通路对细胞减数分裂、有丝分裂过程具有调节作用，并参 5-HTP MAPK/ERK 与有丝分裂后的细胞生长和分化的调控过程。这提示 . 可能通过调节 信号通路影响细胞增殖. 过程。有研究表明，NFκB 抑制. 蛋白 （IκB）家族成员之一的B 细胞白血病/淋巴瘤3 （BCL-3）基因受MAPK/ERK 途径调控并参与细胞周期的调控。 5-HTP goat mammary gland 由此，本研究旨在通过外源添加 处理山羊乳腺上皮细胞 （ epithelialcells，GMECs），探究5-HTP/MAPK/BCL-3对GMECs增殖的调控作用。 本研究获得主要结果如下： (1) CCK-8 175 µM 200 µM 5-HTP 12h GMECs 检测发现 和 浓度的 处理 可促进 增 殖 (P0.05)；AnnexinV-FITC/PI 染色结合流式细胞仪检测发现75 µM和175 µM 5-HTP 处理具有抑制GMECs 凋亡的作用(P0.05)。 (2) 175 µM 5-HTP GMECs p-ERK (P0.05) MAPK/ERK 可促进 中 的表达 ； 抑制剂 (U0126) 抑制GMECs增殖(P0.05)，促进凋亡(P0.05)；MAPK/ERK 激动剂(Honokiol) 促进GMECs 增殖(P0.05)，抑制凋亡(P0.05)；同时，MAPK/ERK 信号通路的磷酸化 BCL-3 mRNA 可以促进 在 水平的表达。 (3) 175 µM 5-HTP 和Honokiol 处理均可使BCL-3 在 mRNA 水平表达上调 （P 0.05）；U0126 处理可降低BCL-3mRNA 水平表达 （P 0.05）；siRNA 干扰BCL-3 p-ERK P 0.05 CyclinD1 Bcl-2 mRNA P 可降低 蛋白表达（ ）， 与 的 与蛋白表达也降低 （ 0.05）。 以上结果表明，175 µM 的5-HTP 处理12h后可通过MAPK/BCL-3轴促进GMECs 增殖并抑制其凋亡，该结果为揭示. 5-HTP 调控山羊乳腺生理状态的分子机制提供了理 论参考。 关键词：5-HTP; 山羊乳腺上皮细胞；细胞增殖；MAPK/ERK;BCL-3 I 西北农林科技大学硕士学位论文