桑椹果腐病病原菌的鉴定及生防菌的筛选.pdf

摘 要 摘 要 桑椹在成熟过程中易被病原菌侵染致病，其中桑椹菌核病的发生频率最高，此外， 也有桑椹果腐病的发生，对我国果桑产业的发展造成了不利影响。在 2017 年 5 月进行 的桑椹病害调查中, 我们发现陕西杨凌农业综合试验示范站桑园有桑椹果腐病的出现， 感染桑椹呈现白色，或者出现枯黄、萎蔫的症状。 本研究对桑椹果腐病的病原菌进行了分离鉴定，明确了桑椹果腐病的致病菌种类， 根据柯赫氏法则对其致病性进行检测，并研究了致病菌的生物学特性。随后，筛选出 对病原菌具有较强抑制作用的生防芽孢杆菌，以期为探寻桑椹果腐病的发病原因和规 律奠定理论基础，同时也为桑椹果腐病的防治提供科学依据和新的方法。本文的主要 研究内容和结果如下： 1、使用常规组织分离法，从桑椹果腐病病果中分离得到一株真菌菌株，在 PDA 培养基上菌落呈圆形，可产生白色气生菌丝和紫色色素。根据显微观察结果，大型分 生孢子较少，呈纺锤型或镰刀型，稍弯曲，向两端逐渐变尖，具有 2~5 个隔膜，大小 15.4–40.7×1.4–3.1 μm (n=25) 。小型分生孢子较多，一端尖细、一端钝圆，大小 3.3– 9.5×2.0–3.8 μm (n=25) ，无隔膜或有 1 个隔膜。通过菌落形态和分生孢子形态观察，初 步认为其为层出镰刀菌(Fusarium proliferatum) 。利用真菌 EF-1a 和 ITS 基因通用引物 对 DNA 进行 PCR 扩增，对扩增产物进行测序分析，结果表明从样品中分离得到的 菌株是层出镰刀菌。 2 、采用菌饼接种法对该菌株的致病性进行检测，发现层出镰刀菌对桑叶和桑椹均 具有较强的感染能力。实验室活体叶片接种结果表明，接种叶片边缘出现黑色或黄色 病斑，并伴有白色霉层的形成。随着时间的增加，白色霉层增多，同时这些病斑的颜 色加深，面积增大，并从边缘向中间扩展。接种 10 天后病斑面积扩大至 40%-70%， 部分病叶腐烂脱落。田间桑椹接种结果表明，接种桑椹发病率为 100%，桑椹整个或部 分面积由红色变为白色，同时周围未被接种的桑椹也被感染发病。七天后，染病的白 色桑果变为暗黄色，果柄部位也发生枯黄。十天后，染病桑果周围的叶片也出现枯黄， 萎蔫的症状。根据柯赫氏法则，对接种发病的桑椹及桑叶进行菌株再分离，经过形态 观察与分子鉴定确定再分离菌株与原接种菌株相同，实验结果表明层出镰刀菌是桑椹 果腐病的致病菌。 3、生物学特性研究结果表明，获得的层出镰刀菌 Z4 ，其最适生长温度为 28 ℃， 最适 pH 值为 7 。在不同的供试碳源中，以麦芽糖最好，对蔗糖利用效果最差。在不同 的供试氮源中，硝酸钾为最适氮源，但对硝酸氨和牛肉膏的利用效果最差。 I 西北农林科技大学硕士学位论文 4 、以分离获得的桑椹果腐病致病菌层出镰刀菌 Z4 和实验室购买的桑椹菌核病致 病菌桑实杯盘菌为指示菌，采用平板对峙培养法从桑椹果腐病病果中筛选出了 4 株对 两种致病菌具有较强抑制作用的生防菌株，实验结果表明，4 株生防菌株对层出镰刀菌 Z4 的抑菌率为 47.78 ％－56.65 ％，对桑实杯盘菌的抑菌率为 84.02 ％－90.10 ％。通过 形态学和分子生物学鉴定，确定获得的 4 株生防菌株均属芽孢杆菌属。 关键词 桑椹；果腐病；层出镰刀菌；致病性检测；生防芽孢杆菌 II 目 录 目 录 摘 要I ABSTRACT III 第一章 文献综述 1 1.1 桑椹病害概述 1 1.2 层出镰刀菌研究进展 1 1.2.1 层出镰刀菌的生物学特性 1 1.2.2 层出镰刀菌的寄主范围及引起病害 1 1.3 生物防治研究进展 2 1.3.1 植物真菌病害的防治方法