mmfscnj出口食品沙门氏菌属包括亚利桑那菌检验方法.docx

MM_FS_CNJ_03出口食品 沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验 MM_FS_CNJ_0335 出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法 1. 适用范围 本方法适用于冻猪肉、 冻鸡肉、鸡蛋黄粉和冰鸡蛋白中沙门氏菌属 （包括亚 利桑那菌）检验。其他食品可参照使用。 样品制备及增菌培养 2.1. 肉类 如为冷冻产品，应在45C以下不超过15min,或在2?5C不超过18h解 冻。若不能及时检验，应置于-15C左右保存。非冷冻而易腐的食品，置于 4C 冰箱保存。 以无菌操作，称取剪碎后的瘦肉样品25g，置于灭菌均质杯内，加入25mL 缓冲胨水增菌液，以8000?10000r/min均质1min,移入盛有200mL缓冲胨水 增菌液的500mL广口瓶内，混合均匀，女口 pH低于6.6，用灭菌1 mol/L氢氧化 钠溶液，调pH至6.8 ± 0.2，于37 C水浴培养4h （以增菌液达到37 C时算起）， 进行前增菌；其后，移取10mL转种于盛有100mL四硫磺酸盐煌绿增菌液的250mL 玻璃瓶内，摇匀，于42土 1C培养20± 2h，进行选择性增菌。必要时，同时另称 取25g剪碎的瘦肉样品，加入25mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液，同样进行均质。其 后，移入盛有200ml亚硒酸盐胱氨酸增菌液的500mL广口瓶内，混合均匀，如 pH低于6.6，用灭菌1 mol/L氢氧化钠溶液调pH至6.8 ± 0.2，于37C培养24 ± 2h，进行直接选择性增菌。 蛋品 冰蛋品（冰鸡全蛋、冰鸡蛋白、冰鸡蛋黄） 按 2.1.1 解冻和保存样品。 以无菌操作称取样品25g，置于盛有225mL四硫磺酸盐煌绿增菌液的 500mL广口瓶内混合均匀，女口 pH低于6.6，用灭菌1mol/L氢氧化钠溶液调pH 至6.8 ±0.2，于37C培养24±2h,进行直接选择性增菌。 干蛋品（鸡全蛋粉、鸡蛋白片、鸡蛋白粉、鸡蛋黄粉） 以无菌操作将样品碾碎后，称取 25g加入盛有225mL缓冲胨水增菌液的 500mL广口瓶内（瓶内事先盛有直径 3?4mm的玻璃珠约50粒），振荡10min， 如pH低于6.6，用灭菌1 mol/L氢氧化钠溶液调pH至6.8 ± 0.2，于37 C培养 20?24h，进行前增菌；其后，移取10mL转种于盛有100mL亚硒酸盐胱氨酸增菌 液的250mL玻璃瓶内，混匀，于42土 1C培养20± 2h，进行选择性增菌。 分离培养 将增菌培养液摇匀，以无菌操作，用直径3mm的接种环分别挑取1环，分别 划线于表面无凝结水的亚硫酸铋和胆硫乳琼脂平板各一个 （必要时亚利桑那菌琼 脂平板可参照使用），于37C培养24±2h0 观察各琼脂平板上有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落，如无典型或可疑菌 落，应再继续培养 24± 2h0 沙门氏菌属的菌落特征见表 10 表 1. 沙门氏菌属菌落特征 琼脂平板 菌落特征 沙门氏菌 亚利桑那菌 亚硫酸铋琼 脂 棕褐色或灰色至黑色，有时有金属光 泽，周围培养基呈棕色或黑色，有些菌 株呈灰绿色，周围培养基不变或微变暗 黑色，周围培养基一般不变黑或微变 黑，有些菌株呈灰绿色，带黑心或不 带黑心 胆硫乳琼脂 无色半透明有黑色中心或几乎全为黑 色，有些菌株无色半透明 乳糖阴性菌株，相似于沙门氏菌菌 落，乳糖阳性菌株为粉红色有暗色中 心 亚利桑那菌 琼脂 黄色有暗蓝色中心，周围培养基中有黄 色沉淀物 粉红色有黑色中心，有时为全黑色， 周围培养基呈红色，被发酵卫矛醇或 蔗糖的细菌包围时，菌落边缘可为浅 黄色 鉴定 筛选试验 每个琼脂平板至少应挑选2个典型或可疑菌落，分别用接种针接种赖氨酸 脱羧酶培养基或尿素酶琼脂一管，接种后无须灭菌接种针，直接再接种三糖铁琼 脂一管于37C培养24 ± 2h。 挑取菌落后的琼脂平板，应置于 4?8C至少保留24h，以备必要时复查。 按表2或表3结果进行判断。 表2.三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶培养基筛选 三糖铁琼脂 赖氨酸脱 羧酶培养基 初步判断 斜面 底层 产气 硫化氢 K A + ( — ) + ( — ) + 可疑沙门氏菌属 K A + ( — ) + ( — ) 一 可疑沙门氏菌属 A A + ( — ) + ( — ) + 可疑亚利桑那菌 A A + ( — ) + ( — ) 一 非沙门氏菌属 K K + / — + / — + / — 非沙门氏菌属 注：K—产碱；+ —阳性反应；（―）—少见反应； A—产酸，——阴性反应；+/——阳性或阴性反应。 表3.三糖铁琼脂和尿素酶琼脂筛选 三糖铁琼脂 尿素酶琼脂 初步判断 斜面 底层 产气 硫化氢 K A + ( — ) + ( — ) 一 可疑沙门氏菌属「 A A + ( — ) + ( — ) 一 可疑亚利桑那菌 K A + ( — ) + ( — ) +