T CVMA 27-2020 非洲猪瘟病毒微滴式数字PCR检测方法.pdf

ICS 11.220 B 41 团 体 标 准 T/CVMA 27-2020 非洲猪瘟病毒微滴式数字PCR 检测方法 Method of droplet d igital PCR for detection of african swine fever virus 2020-12-22 发布 2020-12-22 实施 中 国 兽 医 协 会 发 布 T/CVMA 27-2020 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件涉及专利。 本文件由中国兽医协会提出并归口。 本文件起草单位：中国动物疫病预防控制中心。 本文件主要起草人：原霖、杨林、王传彬、宋晓晖、董浩、倪建强、刘洋、毕一鸣、陈亚娜。 I T/CVMA 27-2020 引 言 本文件的发布机构提请注意，声明符合本文件时，可能涉及到一种检测饲料中非洲猪瘟病毒的数字 PCR技术及试剂盒相关专利的使用。 本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范围无任何立场。 该专利持有人已向本文件的发布机构承诺，他愿意同任何申请人在合理且无歧视的条款和条件下， 就专利授权许可进行谈判。该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案。相关信息可以通过以下联 系方式获得： 专利持有人姓名：中国动物疫病预防控制中心（农业农村部屠宰技术中心） 地址：北京市大兴区生物医药基地天贵大街17号 请注意除上述专利外，本文件的某些内容仍可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利 的责任。 II T/CVMA 27-2020 非洲猪瘟病毒微滴式数字PCR 检测方法 1 范围 本文件规定了非洲猪瘟病毒(african swine fever virus，ASFV)微滴式数字PCR检测方法的原理、试剂 与耗材、仪器与设备、操作步骤、结果分析。 本文件适用于猪血液样品、淋巴结、脾脏、扁桃体、肌肉、血球粉、肉骨粉等样本中非洲猪瘟病毒 核酸的精准定量检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 19489 实验室生物安全通用要求 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 微滴式数字PCR （droplet digital PCR ，ddPCR ）的技术原理是利用微滴化技术将一份反应体系分成 数万个纳升级的微滴进行定量PCR检测，本质上是将传统定量PCR 的一次检测变成数万次检测，提高了 检测的灵敏度和精准度。微滴发生器可以将每一份扩增体系分成数万个均匀的纳升级微滴，每个微滴不 含或者含有一个至数个待检核酸靶分子。每个微滴都将作为一个独立的PCR扩增体系，在PCR扩增仪上 进行终点PCR扩增。利用微滴分析仪逐个对每个微滴进行检测，有荧光信号的微滴判读为1，没有荧光 信号的微滴判读为0 。根据泊松分布原理以及阳性微滴的比例，计算出待