T CVMA 19-2020 猪圆环病毒3型荧光PCR检测方法.pdf

ICS 11.220 B 41 团 体 标 准 T/CVMA 19-2020 猪圆环病毒3 型荧光PCR 检测方法 Real-time PCR assay for detection of porcine circovirus type 3 2020-12-22 发布 2020-12-22 实施 中 国 兽 医 协 会 发 布 T/CVMA 19-2020 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020 《标准化工作导则第1 部分：标准化文件的结构和起草规则》 的规定起草。 本文件由中国兽医协会提出并归口。 本文件起草单位：青岛立见诊断技术发展中心、中国动物卫生与流行病学中心、中国兽医 药品监察所。 本文件主要起草人：张志、孙学强、李阳、刘爽、徐烽烨、宫枫举、官丽娟、邵钰、李翠 翠、李晓成、蒋文明、于晓慧、王琳、周晓翠、王团结。 - 1 - T/CVMA 19-2020 猪圆环病毒3 型实时荧光PCR 检测方法 1 范围 本文件规定了猪圆环病毒3型实时荧光PCR检测的技术要求。 本文件适用于猪圆环病毒3型的核酸检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注明日期 的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注明日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括 所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 SN/T 1193 基因检验实验室技术要求 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 PCV 3 ：猪圆环病毒3型（porcine circovirus type 3 ） 荧光PCR ：实时荧光聚合酶链式反应（Real-time PCR ） Ct ：扩增循环次数（Threshold cycle ） FAM ：羧基荧光素（Carboxyfluorescein ） 5 仪器设备与耗材 5.1 荧光PCR 检测仪 5.2 台式冷冻离心机（可控温至4 ℃、离心速度可达12000 r/min 以上） 5.3 冰箱（2 ℃~8 ℃ 、-20 ℃和-70 ℃三种） 5.4 微量移液器（0.1 μL~2.5 μL、1 μL~10 μL、10 μL~100 μL、100 μL~1000 μL）及匹配的吸 头 5.5 高压灭菌锅 5.6 耗材 5.6.1 1.5 mL 离心管 5.6.2 0.2 mL PCR 薄壁管或八联管 5.6.3 10 μL~200 μL 带滤芯吸头 - 2 - T/CVMA 19-2020 5.6.4 15 mL 样品保存管 6 试剂 6.1 病毒DNA 提取试剂盒 6.2 PCV 3 检测引物和荧光探针，其序列如下： 上游引物qPCV3-F ：5’-CGGAGACGKCGGGAAATCTG-3’； 下游引物qPCV3-R ：5’-CCCCCGTGGCTTGAAATAC-3’