T CVMA 20-2020 动物布鲁氏菌实时荧光PCR检测方法.pdf

ICS 11.220 B 41 团 体 标 准 T/CVMA 20-2020 动物布鲁氏菌实时荧光PCR 检测方法 Real-t imePCR method for the detection of Brucella spp. in animal 2020-12-22 发布 2020-12-22 实施 中 国 兽 医 协 会 发 布 T/CVMA 20-2020 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020 《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中国兽医协会提出并归口。 本文件起草单位：中国兽医药品监察所、中国动物疫病预防控制中心。 本文件主要起草人：秦玉明、董浩、原霖、沈青春、丁家波、彭小薇、蒋卉、冯宇、许冠龙、朱良 全、范学政。 I T/CVMA 20-2020 动物布鲁氏菌实时荧光PCR 检测方法 1 范围 本文件规定了动物布鲁氏菌（Brucella spp. ）实时荧光PCR 的试剂与耗材、仪器与设备、样品、试 验步骤、试验数据处理。 本文件主要用于布鲁氏菌（Brucella spp. ）核酸检测，样本主要包括：动物脾脏、肝脏、淋巴结、 血液、奶样、精液、阴道分泌物、流产胎儿内容物，也可检测被布鲁氏菌污染的环境样品。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 18646 动物布鲁氏菌病诊断标准 GB 19489 实验室生物安全通用要求 NY/T 1467 奶牛布鲁氏菌病PCR诊断技术 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 试剂与耗材 4.1 提取试剂 宜选取商品化的细菌基因组DNA 提取试剂盒。 也可按照NY/T 1467 奶牛布鲁氏菌病PCR诊断技术进行布鲁氏菌DNA提取。 4.2 实时荧光PCR 扩增试剂 应按照不同的实时荧光PCR 平台的说明书选取推荐的实时荧光PCR 扩增试剂。 4.3 引物探针 Brucella spp.上游引物(Bru F)：5 ＇-cgctcgcgcggtggat-3 ＇ Brucella spp.下游引物(Bru R)：5 ＇-cttgaagcttgcggacagtcacc-3 ＇ Brucella spp.探针 (Bru P)：5 ＇-FAM- acgaccaagctgcatgctgttgtcgatg-BHQ1-3 ＇ 5 仪器与设备 1 T/CVMA 20-2020 二级生物安全柜、分析天平、水浴锅、高速离心机、实时荧光PCR 仪、组织研磨器、-20℃冰箱、 涡旋震荡仪、移液器。 6 样品 动物脾脏、肝脏、淋巴结、血液、奶样、精液、阴道分泌物、流产胎儿胃内容物等疑似感染布鲁氏 菌病的动物体液或组织样品，也可检测被布鲁氏菌污染的环境样