T CVMA 39-2020 猫冠状病毒实时荧光RT-PCR检测方法.pdf

ICS 11.220 B 41 团 体 标 准 T/CVMA 39-2020 猫冠状病毒实时荧光RT-PCR 检测方法 Real-t ime RT-PCR method for detection of feline coronavirus 2020-12-22 发布 2020-12-22 实施 中 国 兽 医 协 会 发 布 T/CVMA 39-2020 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020 《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 本文件由中国兽医协会提出并归口。 本文件起草单位：上海市动物疫病预防控制中心。 本文件主要起草人：杨德全、鞠厚斌、赵洪进、王建、沈悦、杨显超、沈海潇、李鑫、葛菲菲、陶 田谷晟、于讳茹。 I T/CVMA 39-2020 猫冠状病毒实时荧光RT-PCR 检测方法 1 范围 本文件规定了猫冠状病毒实时荧光RT-PCR 检测的操作方法。 本文件适用于实验室对临床疑似猫冠状病毒感染的腹水、肛拭子、粪便、血液、血清中猫冠状病毒 核酸的快速检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489 实验室生物安全通用要求 NY/T 541-2016 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 荧光 RT-PCR ： 实时荧光反转录聚合酶链式反应（real-time reverse transcript polymerase chain reaction ） BHQ 1： 无荧光淬灭基团（black hole quencher-1） Ct 值： 每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值所经历的循环数（cycle threshold ） DEPC ： 焦碳酸二乙酯（diethyl pyrocarbonate ） FAM ： 6-羧基荧光素 （6-carboxyfluorescein ） PBS ： 磷酸盐缓冲液（phosphate-buffered saline buffer ） RNA ： 核糖核酸 （ribonucleic acid ） 5 试剂和材料 5.1 引物和探针 上游引物： 5 ＇-GATTTGATTTGGCAATGCTAGATTT-3 ＇ 下游引物： 5 ＇-AACAATCACTAGATCCAGACGTTAGCT-3 ＇ TaqMan 探针： 5 ＇-FAM-TCCATTGTTGGCTCGTCATAGCGGA-BHQ1-3 ＇ 5.2 试剂 5.2.1 总则：除非另有说明，所用试剂均为分析纯，试验用水符合GB/T 6682 的要求，所有试剂均用 无RNA 酶的容器分装。 1