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农产品/食品快速检测教学资源库
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《食用农产品的家庭快速检测》专题-微教材
微课编号及名称
W6-4花生油黄曲霉毒素B1家庭快速检测
微课形式
动画、现场实录
教学设计模式
任务驱动法
教学目标
了解黄曲霉毒素相关知识和胶体金免疫层析检测原理;
学会样品处理和胶体金免疫层析快速检测方法 。
教学内容
涵盖知识
涵盖技能
黄曲霉毒素相关知识;
胶体金免疫层析检测黄曲霉毒素原理。
样品处理和胶体金免疫层析快速检测操作。
黄曲霉毒素之问
1、什么是黄曲霉毒素?
黄曲霉毒素(AF)是一类主要由黄曲霉和寄生曲霉产生的次级代谢产物,是目前为止发现的毒性最大的真菌毒素,其毒性相当于氰化钾的10倍,砒霜的68倍。目前确定的黄曲霉毒素有18种,分为B类,G类和M类。B代表蓝色,因为它在紫外光的照射下会发出蓝色荧光。其中毒性最强的是 “B1”。 G类的黄曲霉毒素在紫外光下因发出黄绿色荧光而得名。B1 、B2和G1、G2,就是经常出现在农产品中的黄曲霉毒素的代表。B1和B2被奶牛吃了之后,分别有一小部分会转化为M1和M2进入牛奶中。这就是牛奶中黄曲霉毒素的来源,M就是“milk”的意思。
2、黄曲霉毒素有毒,如果食用了会对人体产生什么危害呢?
黄曲霉毒素已经被世界卫生组织的癌症研究机构划定为1类致癌物,主要对人及动物的肝脏组织造成损害。急性中毒会有急性肝炎、出血性坏死等表现。慢性中毒则会有肝实质细胞变性、肝硬化等肝脏慢性损伤。同时黄曲霉毒素还会诱发多种癌变,像是肝癌。甚至会出现畸胎。
3、生活中哪些食品容易被黄曲霉毒素污染?
黄曲霉毒素的污染相当广泛,包括谷物、坚果和籽类以及牛乳、食用油等,尤以玉米、花生被污染的程度最严重。新闻报道中花生油黄曲霉毒素超标主要的原因就是花生原料在种植、采收、运输及储存过程中受了到黄曲霉等霉菌污染,企业在生产时也没有严格挑拣花生原料和进行相关检测,其他还有没有采用精炼工艺或工艺控制不当等原因。
4、生活中我们该如何预防黄曲霉毒素的污染呢?
生活中,预防黄曲霉毒素污染有两种:一是防霉,二是去毒。把粮食的含水量控制在12~13%以下就可以防霉;使用化学熏蒸剂,对防止霉菌侵染也有一定作用。去毒的方法,玉米可用脱胚去毒法,植物油可用加碱去毒法等。此外,紫外线照射、盐炒法等也有一定去毒效果。
5、我们国家现在对食品中黄曲霉毒素B1限量有什么规定?
在 GB 2761—2011食品安全国家标准——食品中真菌毒素限量中规定如表1,其中花生油、玉米油中黄曲霉毒素B1 限量指标为20μg /kg。
6、我们在家中有什么方法可以快速检测出花生油中的黄曲霉毒素B1是否超标吗?
目前,测定食品中的黄曲霉毒素的方法有薄层层析法、液相色谱法、酶联免疫法、胶体金免疫层析法等。其中,胶体金免疫层析法快速、简便、直观,比较适合在家中进行快检。
7、胶体金免疫层析法检测黄曲霉毒素B1原理是什么?
采用AFB1胶体金免疫试纸条对黄曲霉毒素B1进行检测采用了竞争法原理,如下图。当被检物质溶液中不含AFB1 ,即阴性时,金标抗AFB1 单抗的反应位点便会被检测线处的偶联抗原AFB1-BSA识别并被结合,因而被截留在该处,当累积到一定程度便在此处出现红色线。当被检物质溶液呈弱阳性时会出现反应强度减弱的检测线。当被检物质溶液中AFB1 的浓度达到一定时,AFB1 就会把金标抗AFB1 抗体的反应位点全部结合,这样当免疫胶体金到达检测线时便不能再与偶联抗原AFB1-BSA发生反应,因而也就不出现红色线。
无论被检测物质中有无AFB1,金标抗AFB1 单抗都会与喷涂在质控线处的AFB1二抗发生免疫反应,即在质控区会出现一条红色线,否则,试纸条无效。
8、胶体金免疫层析法检测黄曲霉毒素B1操作步骤如何?
首先进行样品的前处理。准确称取5.0g有代表性的试样于50mL离心管中;
配制80%甲醇-水溶液50mL于试剂瓶中;
根据试剂盒检测限,量取40mL80%甲醇-水溶液加入试样管中;
振荡3min;
配平后 4000r/min离心5min以获取上清液;
吸取少许上清液滴至pH试纸上观察pH,如果提取后上清液pH<5时,用2M NaOH溶液调pH至7.0-8.0后再进行稀释检测。
取上清100μL,加入样品稀释液200μL,混匀,待检。
从包装袋中取出检测条,将所需微孔试剂置于空微孔板架中;注意在检测前需将试剂盒和待检样本溶液恢复至室温;打开微孔试剂时,轻轻揭开密封膜,切勿用力过猛以免有粉末飞出;检测条打开后要在一个小时内使用。
用移液器吸取待检样品溶
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