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E.coli Competent Cells
DH5α
使 用 说 明 书
Takara Code : D9057A * :也可以使用以下快速转化方法,但效率会有所下降。
1. 取适量质粒加入到microcentrifuge tubes 中,冰上冷却2 min。
包 装 量 2. 取100 μl感受态细胞加入到上述microcentrifuge tubes 中,混匀
并冰浴5 min。
Competent Cells DH5α 100 μl × 10 支 3. 在含有X-Gal、IPTG、Amp 的L-琼脂平板培养基上培养(平板
Control DNA (pUC19 ,0.1 ng/μl ) 10 μl × 1 支 使用前需要在37℃预热30 分钟),形成单菌落。计数白色、蓝
色菌落。
保 存 : -80℃
注意事项
制品说明 1. 一定要用干冰运输。
感受态细胞(Competent Cells )是一种具有摄入外源DNA能力的受 2. 不立即使用的感受态细胞请在-80℃下保存(融化后的感受态细
容菌,它可以摄取外源的质粒DNA等。在进行基因重组实验时,使 胞不能再冻结保存)。
用感受态细胞的转化实验应用十分广泛。在制作基因文库、重组质 3. 转化时请使用传热性能较好的试管。一般的 1.5 ml 微型离心管
粒体以及进行亚克隆实验时,特别是在目的基因含量十分低的情况 也可使用,但转化效率会有所下降(此时请在使用方法5.的42℃
时,使用高效的感受态细胞显得十分重要。 下放置60 秒)。
Takara公司在Hanahan方法的基础上进行了改良,制备出了高效的 4. 对100 μl 的感受态细胞,用于转化的质粒DNA 量请控制在10
感受态细胞(都为EK1系列的宿主大肠杆菌)。 ng 以下,并保证 DNA 溶液的体积在 20 μl 以下。否则会影响
转化效率。
Genotype 5. 使用SOC 培养基的地方也可使用 LB 培养基,但此时转化效率
-
F ,φ80dlacZ △M15, △(lacZYA-argF)U169, deoR, recA1, endA1, 会有所下降。
- + -
hsdR17(rk ,mk ), phoA, supE 44, λ, thi-1, gyrA 96, relA1 6. 包装中附有0.1 ng/μl 的pUC19 DNA ,供作对照实验使用。
细胞种类 备 注
α-互补性选择宿主 E.coli DH5α
E.coli DH5α在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化时,由于载体
DNA产生的LacZα多肽和DH5α编码的lacZ△M15相结合,从而显示β SOC 培养基的组成
-半乳糖苷酶活性(α-互补性)。利用这一特性,
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