大肠杆菌dh5a使用说明.pdfVIP

E.coli Competent Cells DH5α 使 用 说 明 书 Takara Code : D9057A * ：也可以使用以下快速转化方法，但效率会有所下降。 1. 取适量质粒加入到microcentrifuge tubes 中，冰上冷却2 min。 包 装 量 2. 取100 μl感受态细胞加入到上述microcentrifuge tubes 中，混匀 并冰浴5 min。 Competent Cells DH5α 100 μl × 10 支 3. 在含有X-Gal、IPTG、Amp 的L-琼脂平板培养基上培养（平板 Control DNA （pUC19 ，0.1 ng/μl ） 10 μl × 1 支 使用前需要在37℃预热30 分钟），形成单菌落。计数白色、蓝 色菌落。 保 存 : -80℃ 注意事项 制品说明 1. 一定要用干冰运输。 感受态细胞（Competent Cells ）是一种具有摄入外源DNA能力的受 2. 不立即使用的感受态细胞请在-80℃下保存（融化后的感受态细 容菌，它可以摄取外源的质粒DNA等。在进行基因重组实验时，使 胞不能再冻结保存）。 用感受态细胞的转化实验应用十分广泛。在制作基因文库、重组质 3. 转化时请使用传热性能较好的试管。一般的 1.5 ml 微型离心管 粒体以及进行亚克隆实验时，特别是在目的基因含量十分低的情况 也可使用，但转化效率会有所下降（此时请在使用方法5.的42℃ 时，使用高效的感受态细胞显得十分重要。 下放置60 秒）。 Takara公司在Hanahan方法的基础上进行了改良，制备出了高效的 4. 对100 μl 的感受态细胞，用于转化的质粒DNA 量请控制在10 感受态细胞（都为EK1系列的宿主大肠杆菌）。 ng 以下，并保证 DNA 溶液的体积在 20 μl 以下。否则会影响 转化效率。 Genotype 5. 使用SOC 培养基的地方也可使用 LB 培养基，但此时转化效率 - F ,φ80dlacZ △M15, △(lacZYA-argF)U169, deoR, recA1, endA1, 会有所下降。 - + - hsdR17(rk ,mk ), phoA, supE 44, λ, thi-1, gyrA 96, relA1 6. 包装中附有0.1 ng/μl 的pUC19 DNA ，供作对照实验使用。 细胞种类 备 注 α-互补性选择宿主 E.coli DH5α E.coli DH5α在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化时，由于载体 DNA产生的LacZα多肽和DH5α编码的lacZ△M15相结合，从而显示β SOC 培养基的组成 -半乳糖苷酶活性（α-互补性）。利用这一特性，