畜禽繁育技术 模块六畜禽人工授精技术、畜禽繁育技术 实训10精子密度计数测定教案.doc

国家高等职业教育畜牧兽医专业教学资源库 PAGE 1 实训10精子密度计数测定教案 一 、目的和要求 由于目测法不够准确，所以采用计数的方法，测定1ml精液内的精子数。要求学生掌握用血细胞计数法测定精液准确密度的方法，为定期校正精子密度仪提供依据。 二、材料与器械 1．配有低倍镜及高倍镜的生物显微镜、 2．血细胞计数板，红、白细胞吸管。95%酒精，擦镜纸、滴管、纱布、小试管、玻璃棒、电源插板、手摇计数器。 3．家畜精液、生理盐水、3%氯化钠溶液。 三、内容步骤 1．介绍血细胞计数室的构造 血细胞计数室中有一块计算板和红、白细胞吸管。计算板上有2个计算室，每个计算室长宽各1毫米，面积1毫米2，盖上盖玻片时，盖玻片和计数室的高度为0.1毫米，计数室的总体积为0.1毫米3。计数室的构成由双线或三线组成25个(5×5)中方格；每个中方格内有16个小方格(4×4)；共计400个小方格，如下图所示。 红细胞吸管能对精液进行100或200倍的稀释，适合于牛、羊精液检查；白细胞吸管能对精液进行10或20倍的稀释，适合于猪和马的精液检查。 2.精液的稀释 将精液注入计数室前必须对精液进行稀释，以便于计数。 牛羊鸡的精液密度高，用红血球吸管；若将原精液吸取至刻度“0.5”处，再吸取3％的NaCl液至刻度 “101”处，这样就对精液进行了200倍的稀释。若将原精液吸取至刻度 “1.0”处，再吸取3％的NaCl液至刻度 “101”处， （1）猪、马、兔的精液密度低，用白血球吸管；若将原精液吸取至刻度“0.5”处，再吸取3％的NaCl液至刻度 “11”处，这样就对精液进行了20倍的稀释。若将原精液吸取至刻度 “1.0”处，再吸取3％的NaCl液至刻度 “11”处， （2）用拇指和食指堵住吸管的两端进行来回的充分摇动，混合均匀，然后弃去吸管前端液体2～3滴备用。 （3）还有其他的稀释方法：如在10 ml离心管中，加入0.5 ml精液，再用3%的NaCl液稀释至10 ml，即为20倍稀释。也可用2%伊红溶液稀释精子，既能杀死精子又使精子头部着色，使计数更容易。 3.显微镜准备 在显微镜400倍下，找出计数板上的方格，在计数室上盖上盖玻片，将方格调整到最清晰位置。 4．滴片 从吸管挤出一小滴稀释好的精液，在盖玻片和计算板交界处的边缘上轻轻一点，精液会自然充满盖玻片和计算板之间，注意不要使精液溢出盖玻片之外，也不能因精液不足而使计数室内有气泡，否则，应重新操作。静放2分钟，开始计数。 5．镜检、计数 载物台要平置，不能倾斜，光线不必过强，调整显微镜螺旋，直至能同时看到方格和精子为止，观察并计数。计数时选5个有代表性的中方格，即从左上至右下连续的方格或四角和中央的方格。对于头部压线的精子，采用“上计下不计，左计右不计”的原则，避免重复和漏掉（图）。 6．计算 lml原精液中精子数= 5个中方格的精子数×5(25个中方格的精子数)×10(1mm3内的精子数)×1000(1ml稀释后的精子数)×稀释倍数。 为保证检查结果的准确性，滴入计算室的精液不能过多；否则，会使计算室的高度增加。为了减少误差，应连续检查2次，取其平均值。如果误差大于10％，要求做第三次，第三次结果与前两次中数据接近的一次平均计算，作为最后结果。 7．用具洗涤 吸管洗涤步骤：自来水——蒸馏水——95%酒精——乙醚 计数板洗涤步骤：自来水——蒸馏水——纸巾擦干备用 四、 实训报告 1.写出实验过程和精子计数结果。 2.对照下表分析实验结果 表 各家畜（禽）精液中精子的密度 密度\畜种 牛 羊 猪、马 兔 鸡 （亿/毫升） 8～15 20～30 1～1.5 2～3 35～38