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增殖相关基因 PCNA(Proliferating cell nuclear antigen) 一种蛋白质，在DNA复制和核苷酸的切除修复中起到作用 Ki-67 - proliferation related antigen Ki-S1 - proliferation related antigen Phospho-histone Cyclin D1, E, A, B1 BrdUrd Incorporation Bromodeoxyuridine (BrdU) 是一个胸腺核苷的类似物 能够在细胞增殖和细胞周期状态分析中起作用 BrdU能与正在复制周期内的细胞相结合 使用BrdU抗体能够检测到BrdU BrdUrd Incorporation 细胞分裂的分析 哺乳动物的免疫系统需要有大量的增殖，能够确保抗原特异性的T细胞和B细胞具有足够的增殖速度，能够对付治病生物造成的感染 CFSE是一种示踪染料，能够均等地在两个子代细胞中分布，其结果可以区分出8-10代的子细胞。 Tracing Dye(CFSE) Apoptotic Cell Death -- a genetically encoded cell death program, which is morphologically, biochemically and molecularly distinct from necrosis Flow cytometry of apoptotic cell death 细胞散射光 在细胞调亡中，细胞收缩，从而FSC下降，SSC上升或是没有明显变化 Flow cytometry of apoptotic cell death 荧光吸收 细胞的胞膜对于DNA染料的通透性和细胞的活性、死亡和凋亡相关，像PI、EB、Hoechst-33342等，可以用来区分活细胞、死细胞和凋亡细胞 Flow cytometry of apoptotic cell death FCM of Caspases 通过抗体和活化的caspase-3片断相结合来检测 使用特异性的caspase-3荧光底物 新的抗原决定基CK18 Flow cytometry of apoptotic cell death 线粒体功能的变化 TMP会在调亡中产生，可以通过一些标记用流式细胞仪检测。使用有膜穿透性的亲脂性阳离子荧光染料，如Rh123, DiOC6, JC-1,CMXRos等，可作为流式检测的探针。 当细胞发生调亡时，一个线粒体膜表面蛋白——7A6抗原会出现 Bcl-2/bax family of proteins. Flow cytometry of apoptotic cell death 钙离子流和 pH值变化 胞浆内Ca2+ 水平的上升和由于细胞内环境酸化造成的选择性的pH值的调节降低是伴随着细胞凋亡产生的后果之一。 使用Ca2+ 选择性荧光探针，如 Quin-2, Fluo-3, Indo-1 通过流式检测是测定细胞内Ca2+浓度的最佳方案 酸化的检测同样可以用对pH敏感的荧光探针，如 DCH, BCECF, BCECF-AM, SNAFLs, SNARFs等进行检测 Flow cytometry of apoptotic cell death Phospholipid redistribution Flow cytometry of apoptotic cell death DNA 链的断裂 细胞凋亡晚期中，核酸内切酶（某些Caspase的底物）在核小体之间剪切核DNA，产生大量长度在180-200 bp 的DNA片段。 断裂的末端可以通过末端转脱氧核苷酰酶(TdT)连接上dUTP。 Flow cytometry of apoptotic cell death 细胞DNA含量 在凋亡细胞中，用PI染色，通过流式检测DNA含量，可以发现一种亚群的细胞，其染色荧光强度下降。这是由于随着调亡的进行，核酸内切酶活化，随后一部分DNA泄漏出去，造成细胞内DNA含量下降造成的。 Flow Cytometry of Apoptotic Cells PI - Fluorescence # Events Apoptotic cells Normal G0/G1 cells An Integrated Approach  to Cell Immunology Immune Function assay 免疫细胞亚群检测 Antigen-peptide specific T cells 检测 T-cells 活化 Treg Cells 细胞内细胞因