畜禽繁育技术 畜禽繁育技术 116胚胎鉴定和保存.ppt

甘油冷冻液EMCARE 三、胚胎体外保存 3. 胚胎的解冻后处理方法 如果是用甘油冷冻液冷冻的胚胎，需要对胚胎进行脱甘油处理。方法：用钢钎推动细管棉塞，将细管中的胚胎推入培养皿中，然后在显微镜下，用吸管将胚胎分别移入由高向低不同甘油浓度的解冻液中，在每种解冻液中分别停留5分钟，最后用胚胎保存液洗涤3—5次，装管进行移植。 用乙二醇冷冻液冷冻的胚胎：解冻方法和甘油基本相同，只是脱保护剂的步骤不同。 胚胎鉴定和保存 一、检胚 二、胚胎质量鉴定 三、胚胎体外保存 胚胎鉴定和保存 一、检胚 检胚：是指在体视显微镜下，从冲胚液中寻找胚胎并转移到胚胎营养保存液中； 胚胎鉴定：是将检查到的胚胎，应用各种方法对其质量和活力进行评定。 一、检胚 1．检胚 检胚应在20～25℃的无菌操作室内进行，如果用500～1000ml量筒收集冲胚液常采用静置法：静置20～30min，弃去上液，留下面几十毫升冲胚液倒入平皿或表面皿内检查。 目前，常用专用的集卵杯，集卵杯有底部过滤和侧壁过滤两种，细小组织可随冲胚液通过75 μm的滤网膜流出，胚胎留在杯底，日本产侧漏式集卵杯，冲洗后可直接检卵。 一、检胚 1．检胚 将集卵杯或表面皿置于带底光源、能连续变倍的体视显微镜下检卵。胚胎一般沉于杯底部，直径只有120—180微米，是外层有透明带的球形体，它在冲卵液中的折光性较其他不规则组织碎片要强，色调为灰色。一般在10倍左右已能发现卵子，检卵放大倍数越大视野越小不易操作，按集卵杯底部的方格逐格检查，不能遗漏。发现胚胎后，立即用吸胚器移入含有20％犊牛血清PBS培养液中。 检出胚胎保存在营养液中 一、检胚 2.胚胎的清洗 ①将来自同一只供体的胚胎放在一起，每批洗涤的胚胎数应少于10枚。 ②在洗涤前应用拨针去除胚胎透明带上的黏附物。 ③将胚胎从前一培养液移入下一培养液时，应更换胚胎吸管（头）。 ④随胚胎移入下一液体中的原液越少越好。 ⑤每批胚胎至少洗涤5次（每次洗涤应有充分的时间）。 二、胚胎质量鉴定 4 1 胚胎发育阶段的特征与胚龄的符合程度 2 胚胎的质量评定主要依据： 胚胎的形态学结构 二、胚胎质量鉴定 1.胚胎的发育阶段 在配种后第6—7天采集的胚胎应该发育到了桑葚期至扩张囊胚期。若冲出的胚胎不处于该阶段，则为不可用胚。比如，此时采集到的2~8细胞期胚胎，说明该胚胎发育迟缓，是不可用胚胎。 1.胚胎的发育阶段 二、胚胎质量鉴定 图 各发育阶段的胚胎特征 8细胞胚胎 卵周隙 表 胚胎各发育阶段的形态特征 1.胚胎的发育阶段  发育阶段 胚龄（天） 形态特征 2~8细胞期 1~3 可清楚地观察到2个~8个胚胎卵裂球细胞，卵周隙较大。 桑椹胚（M） 5~6 卵裂球隐约可见，胚胎细胞团体积几乎占满卵周隙，形如桑椹。 致密桑椹胚（CM） 5~7 卵裂球进一步分裂，卵裂球只增数量不增体积，使得胚胎内细胞团收缩变紧，颜色略暗，细胞团占卵周隙的60%~70%。 早期囊胚 （EB） 6~7 细胞团内出现发亮的囊胚腔，此时的滋养层和内细胞团尚难于区分，细胞团占卵周隙的70%~80%。 囊胚（BL） 6~8 囊胚腔扩大，内细胞团和滋养层界限清晰，细胞团充满卵周隙。 扩张囊胚（EXB） 7~8 囊胚腔充分扩张将内细胞团挤往一边，胚胎体积增至1.2倍~1.5倍，透明带变薄，相当于原厚度的1/3，胚胎呈典型的戒指状。 孵化胚（HB） 7~9 由于囊胚腔继续扩张，致使透明带破裂，细胞团脱出透明带。 注：胚胎发育距供体发情日的天数为胚龄。 二、胚胎质量鉴定 2.胚胎鉴定标准 胚胎质量的鉴定主要靠观察胚胎的形态结构，包括：细胞团的紧密程度、有无游离细胞、透明带是否完整、胚胎的明暗度以及卵裂球细胞的大小是否一致等等。根据上述指标，结合胚胎的发育阶段，一般将胚胎分成1级、2级、3级、4级四个等级。见表分级标准。 1级、2级胚胎可用于鲜胚移植和冷冻保存；3级胚胎只能用于鲜胚移植，不能用于冷冻保存；4级胚胎为不可用胚胎。检出的可用胚胎应尽快冷冻保存或移植。 二、胚胎质量鉴定 2.胚胎鉴定标准 1级胚胎 胚胎形态完整，处于正常的发育阶段，外形匀称，胚胎呈球形；卵裂球细胞大小均匀，结构紧凑，透明度适中，没有或只有少量游离细胞。 2级胚胎 发育稍迟缓，有少量游离细胞（少于20%），细胞团完整，胚胎仍呈球形，细胞之间结合紧密。 3级胚胎