正交法研究光合细菌计数培养基.doc

止交法研究光合细菌计数培养基 摘 要:利川正交设计试验法研究了碳源、酵母膏、微最元素、磷酸盐、铁盐、琼脂等6个因 了对光合细菌培养计数的影响，确定了各因素的最佳配比，其结果是:NaHC03l.Og, CH3COONa 3. Og,酵母斉 2. Og,微量元素 Oml/L, K2HP040. 5g, Fe-EDTA 0. 005g,琼脂 8g? 该纟R合加上 NH4C1 Og, MgC12. 6H20 0. 2g, NaC15. Og, dH20 lOOOmL,即得出光合细菌计数培养基，称之为R培养 基。该培养基对光合细菌的检测具有准确、快速、简便等优点。 关键词:光合细菌；培养基；正交法 1前言 光合细菌(Photosynthetic Bacteria,简称 PSB)是一 大类能进行不产氧光合作川的细菌，由于它具有能利 用有机小分了作为碳源的生理特性，且菌体木身又无 毒无害、营养丰富的特点，因而在水产养殖、废水处理 等行业屮得到了广泛应用，并在新能源开发、种植业、 食品、化妆品、医药保健等行业显示出广阔的应用前 景［1, 2］,特别是在水产养殖方面，随着可持续发展理 念的兴起,光合细菌在水产健康养殖中扮演着越来越 重要的角色，并正进入了一个快速发展阶段。但是由 于缺乏统一的检测方法,光合细菌的主要指标，即活 菌密度八玄无从准确测定，致使光合细菌制剂至今还 没有国家标准，由此造成光合细菌市场鱼龙混杂，反 而成为水产养殖及环境生态的一大隐患。 目前，有关光合细菌的重点仍在菌种的分离、培 养及其应用技术的研究，研究屮对光合细菌培养量的 评估，基木上是采用光电比色法或显微直接计数法。 rh于市伟光合细菌制剂存在菌种复合、杂菌污染、培 养基质干扰以及色素掺假等问题，上述两种方法显然 不够准确,光合细菌的准确计数必须通过菌落计数来 确定。然而目前这方面的报道还很少，仅见孙军徳等 人［3］作了光合细菌双层平板计数法的研究，而该报道 只是针对实验室某一纯培养物的研究结果，还难以推 广应用。 木文采用正交法研究出光合细菌的计数培养基， 即R培养基，经验证，该培养基对光合细菌的检测具 有专一性和特异性,而且快速简便，在实际应用屮效 果良好。 2材料与方法 1试验材料 光合细菌菌种:沼泽红假单胞菌(Rhodopseu- domonas palustri s) x 球形红假单胞菌(Rhodopseudomonas sphaeroids) 荚膜红假单胞菌(Rhodopseudomonas capsu- late)混合培养物，由华东师范大学环境科学研究所提 供，浑球红假单胞菌RS601 (Rhodopseudomonas spheroids)由屮科院上海植物生理研究所提供，红球菌 AB96026 (Rhodococcus sp.) |t|屮国典世培养物保藏屮 心提供。 其他菌种:桔橙色动球菌AA98005(Kineococcus aurantiacus)、桔橙小单胞菌 AA95041 (Micromonospora aurantiaca) 深红酵母 AY91005 (Rhodotorula rubra) 红 酵母AY93148 (Rhodotorula sp.)、金黄色葡萄球菌 AB91053(Staphylococcus aureus) a 大肠埃希氏杆菌 AB90054(Escherichia coli)、鼠伤寒沙门氏菌 AB94007 (Salmonella typhimurium) 痢疾志贺氏菌 AB200058 (Shigella dysenteriae)由中国典型培养物保藏中心提 供。副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus) 溶藻弧菌 (Vibrio alginolyticus) [tl木实验室从海水屮分离并经 VITEK-AMS鉴定至种。 所用试剂均为分析纯。 2.2方法 2. 2.1光合细菌培养条件的确定 参照文献[3~7],选择光合细菌的培养条件为:温 度28e30e,光照强度BOOOLx,培养72h,如果菌落 #45# 2004年 检验检疫科学 第14卷第1期 *作者简介:刘军义仃966-),男，屮科院武汉病毒研究所毕业，理学硕士，己发表论文15篇。表 1试验因子水平 因了水平 因了种类及其代号 A 碳源(g) B 酵母膏(g) C 微最元素贮液(mL) D 磷酸盐(g) E 铁盐(g) F 琼脂(g) 一水平 NaHC03 2.0 1. 0 3 KH2P04 0.5 0.2 8 二水平 NaHC03 4.0 1.5 5 K2HP04 0.5 0. 1 20 三水平 NaHC03 1. 0CH3C00Na 3. 02. 0 0. 5 KH2P04 0. 25 0. 025 5 四水平 NaIIC03 2. 0