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应按组织培养程序来没计,避免某些环节倒排,引起日后工作混
乱。植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件 需要一定的设备.器材和用具,同时还需要人工控制温度.光照.湿 度等培养条件。
一.实验室组成
基本实验室 基本实验室包括准备室.洗涤灭菌室.无菌操作室.培养室■缓
冲间,是组织培养实验所必须具备的基本条件。如进行工厂化生产, 年产4万?20万,需3?4间实验用房,总面积60平方米。
准备室(化学实验室)
功能:又叫化学实验室,进行一切与实验有关的准备工作:完成
所使用的各种药品的贮备.称量.溶解.器皿洗涤.培养基配制与分 装■培养基和培养器皿的灭菌■培养材料的预处理等。
要求:最好有20平方米左右。要求宽敞明亮.以便于放置多个
实验台和相关设备,方便多人同时工作;同时要求通风条件好,便于 气体交换;实验室地面应便于清洁,并应进行防滑处理。
分类: 分体式■研究性质实验室,分开的若干房间将准备室分解为药品
贮藏室.培养基配制与洗涤室和灭菌室等,功能明确,便于管理,但 不适于大规模生产。
通间式■规模化实验室,准备室一般设计成大的通间,使试验操
作的各个环节在同一房间内按程序完成。准备试验的过程在同一空间 进行,便于程序化操作与管理,试验中减少各环节间的衔接时间,从 而提高工作效率。此外还便于培养基配制.分装和灭菌的自动化操作 程序设计,从而减少规模化生产的人工劳动,更便于无菌条件的控 制和标准化操作体系的建立。
设备:准备室应具备实验台.药品柜■水池.仪器.药品.防尘
橱(放置培养容器).冰箱、天平.蒸懾水器.酸度计及常用的培养基 配制用玻璃仪器等。
洗涤灭菌室
功能:完成各种器具的洗涤■干燥.保存■培养基的灭菌等。
要求:洗涤灭菌室根据工作量的大小决定其大小,一般面积控制
在30-50m2o在实验室的一侧设置专用的洗涤水槽f用来清洗玻璃
果工作量大,可以购置一台洗瓶机。准备1-2个洗液缸,专门用于 洗涤对洁净度要求很高的玻璃器皿,地面应耐湿并排水良好。
设备:水池.落水架.中央实验台.高压灭菌锅.超声波清洗器■
干燥灭菌器(如烘箱)等。
无菌操作室(接种室)
功能:也叫接种室,主要用于植物材料的消毒.接种.培养物的
转移.试管苗的继代.原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的 技术程序,是植物离体培养研究或生产中最关键的一步。
要求:接种室宜小不宜大,一般7 ~ 8平米(10-20平米)即可f
其规模根据实验需要和环境控制的难易程度而定。要求封闭性好, 干爽安静,清洁明亮,能较长时间保持无菌,因此不易设在容易受潮 的地方;地面.天花板及四壁尽可能密闭光滑,易于清洁和消毒;配置 拉动门,以减少开关门时的空气扰动;为便于消毒处理,地面及内墙 壁都应采用防水和耐腐蚀材料;为了保持清洁f无菌室应防止空气对 流。接种室要求在适当位置吊装1 ~ 2盏紫外线灭菌灯,用以照射灭
菌。最好安装一小型空调,使室温可控,这样可使门窗紧闭,减少与 外界空气对流。
一般新建实验室的无菌室在使用之前应进行灭菌处理■处理方法
是甲醛和高猛酸钾熏蒸,并需定期灭菌处理,还可用紫外线照射
l?2h/周,
l?2h/周,
或每次使用前照射10-30mino
4■培养室
功能:对接种到培养瓶等器皿中的植物离体材料进行控制条件下
的培养,无论是研究性实验室还是生产性实验材料进行培养的场所。
要求:约需10?20平方米左右』咅养室的大小可根据需要培养架的 大小.数目.及其他附属设备而定,其设计以充分利用空间和节省能 源为原则。基本要求是能够控制光照和温度,并保持相对的无菌环境, 因此,培养室应保持清洁和适度干燥;为满足植物培养材料生长对气 体的需要,还应安装排风窗和换气扇等培养室的换气装置;为节省能 源和空间,应配置适宜的培养架,并安装日光灯照明。
研究用实验室,通常可根据光照时间设置成长日照.中日照■短
日照培养室,也可以根据温度设置成高温和低温培养室,每一个培养 室的空间不宜过大,便于对条件的均匀控制。进行精细培养类型如细 胞培养和原生质体培养,可采用光照培养箱或人工气候箱代替培养 室。
为了控制培养室的温度和光照时间及其强度,培养室的房间不要
光照由日光灯控制。天花板和内墙最好用塑料钢板装修,地面用水磨 石或瓷砖铺设,一般要分两间,一为光照培养室,一为暗培养室。培 养室外应有一预备间或走廊。
培养材料放在培养架上培养。培养架大多由金属制成,一般设5
层,最低一层离地高约lOcm ,其他每层间隔30cm左右f培养架即 高1.7m左右。培养架长度都是根据日光灯的长度而设计,如采用
40W日光灯f则长I.3m f 30W的长Im f竟度一般为60cmo日光
灯一般用40W
灯一般用40W ,固
定在培养架的侧面或搁板的下面,每层有两支日
光灯,
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