植物组织培养的设备与使用方法.doc

植物组织培养的设备与使用方法 植物组织培养是在严格的无菌条件下培养植物材料。要达到无菌操作和无菌培养，就需 要认为创造无菌的环境，使川无菌的器具，同时还需要人丁?控制的温度、光照、湿度等培养 条件。无菌环境和无菌条件的创造需要一定的设备，实验设备因工作的目的、具体的任务和 所具有的条件而异。但人多数采用化学实验室、微生物实验室及医疗上的一些设备、器材和 用具。 图1组培室分区布局 1 ?实验室基本组成 无菌操作室 在植物组织培养屮，无菌操作室(clean chamber)是进行植物材料的分离及培养体转移 的一个重要场所。由于植物组织培养需长时间的无菌操作，所以无菌条件的好坏对组织培养 成功与否起重要作用。微生物的培养生长时间短，而植物组织培养短的一个月，长的达儿年。 所以，防止细菌和霉菌混入是提高工作效率和影响生产成本的关键。 无菌操作室基本要求是：干净无菌、密闭、光线好。一般安装滑动门，使空气不致流 动，以防外界菌及尘埃的仪入；墙舉光滑平柴，地而平坦无逢，便于清洁工作；室内安装紫 外灯，以便灭菌，还要有照明装宜及灯座，以备临时增加设备之用；室内有超净工作台、移 动式载物台(医用平板推车)、广口瓶、试管、三角瓶、酒精灯、接种工具等。面积根据工 作性质可大可小，小的无菌操作室一般一间5~7肝即可。 接种室内主要安放超净工作台，分单人使用和双人同时连续作业使用两种。超净台屮 准备接种用的器具，如尖头小银子、弯头小锻子、接种针、解剖刀、手术剪刀等，以及酒精 灯、储存70%酒精浸泡的棉球的广口瓶筹。如果进行生长点或幼胚等细小结构的分离与接种, 还应当在超净工作台内放置一台小型的双目解剖镜，以便观察、解剖和分离细小的外植体。 小型离心机主要川于分离和收集液体培养屮的细胞、单花粉及原生质体等，也可用来 筛选处于不同发育阶段的胚状体。 无菌室外最好设置预备室作为缓冲间，以防工作人员进出时带进杂菌。控温光照培养箱 可以安放在缓冲问内。预备室与无菌室之间最好以玻璃相隔，便于观察和参观。在预备室可 放置工作服、鞋、帽等，也需要装白來水和紫外灯。 化学实验室 纽织培养屮植物植物材料是生长在人工配制的培养基上，这就需要在化学实验室预先 配制好培养基。化学实验室一般由以下儿个部分组成： 洗涤室 主要用于培养容器、玻璃器皿、用具和培养材料的清洗。新购进的玻 璃器皿一般先用1 %盐酸除去可溶性无机物，再用屮性洗涤剂；使用屮的玻璃器皿可用洗涤 剂清洗，白來水冲洗；对较难洗涤的器皿，如吸管筹应用洗液进行洗涤。 洗涤室需备有工作台而、上水管和下水管、水池、落水架、电源、干燥箱等。 药品室 用于存放无机盐、维生索、氨基酸、糖类、琼脂、生长调节物质等各 种化学药品。要求室内干燥、通风、避免光照。室内设有药品柜、冰箱等设备。各类化学试 剂安要求分类存放，需要低温保存的药剂应置于冰箱保存。有毒药品应按规定存放和管理。 称量室 根据需要，配备各类犬平。要求干燥、密闭、无直射光照。一般配备1/100 普通天平(coarse balance)和1/10 000的电子天平(sensitive balance),可能的话。加配1/1000 和1/100 000的天平，形成系列。除电源外，应设有防震固定的台座。 培养基配置室用于配制、分装培养基以及培养基的暂时存放。室内应配有各种 试管、三角瓶、烧杯、量筒、吸管、移液器等器具；有平面实验台以及安放药品和器皿的各 类药品柜、器械柜、物品存放架；有水浴锅、电饭锅、微波炉、过滤装宜、酸度计、分注器 以及贮藏母液的冰箱等。 灭菌室用于器皿、器械、封口材料和培养基的消毒灭菌。要求墙壁耐湿、耐高 温。室内需要备有高压蒸汽灭菌装置、细菌过滤装置、煤气灶和电炉等。 玻璃器皿和小川具的消毒常采川干热灭菌法，150°C约保持l-3ho培养基、蒸谓水及一 些用具，采用120C髙压蒸汽灭菌法。 在没有条件的地方，可将上述工作合并在一个房间内完成，但设备的安装与排列要合 理，房间要宽敞、明亮、通风。 培养室 培养室(culUire room)是将接种到试管等的培养材料进行培养生长的场所。需配有固 定式培养架、旋转式培养架、转床和摇床、控温控光设备，以满足器官(芽、茎、花药等)、 愈伤组织、细胞和原生质体的固体和液休培养的需要。 进行固体培养和试管苗人量繁殖时，培养材料通常摆在培养架上，制作培养架应考虑 使用方便、节能、充分利用空间以及安全可靠。培养架材料为金属、铝合金或木制品。隔板 可用玻璃板、木板、纤维板、金属板等，最好使用玻璃板或铁丝网，既透光，上层培养物乂 不受热。为使用方便，通常设计为5?7层，最低一层离地而高约50cm,以上每层间隔30cm 左右，培养架高约1.7-2.3m3 般在每层上方装置日光灯以供补充光照,培养架长度通常根 据日光灯的长度设计