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植物组织培养课堂笔记不完整版 植物组织培养课堂笔记 第一章 植物组织培养：在无菌或人工控制的条件下，利用适宜的培养基对离 体的植物进行培养，使其再生成组织或完整的植株。 过程：外植体 愈伤组织再分化 植株 名词解释： 愈伤组织脱分化织的过程。 再分化过程。 滤纸 平板培养：将悬浮培养的细胞接种到一薄层固体培养基上进行培养的 技术。 用途：分离得到单细胞无性系。 操作：培养基冷却到35摄氏度时（尚未固化），将细胞悬浮液与培养 基充分混合后倒入培养皿屮（1mm左右）（水浴恒温35摄氏度） 细胞直板率：能够分裂长出细胞团的细胞占接种细胞总数的百分率。 悬浮培养：养基中进行液体培养。 细胞全能性：（由强到弱） 顶端分生组织层间分生组织侧生分生组织 输导组织厚 壁组织 植物细胞分裂能力分类： ③通常不分裂，表皮细胞，薄壁细胞。 取材材料消毒转接 第一节、培养基成分 （一）无机盐 大量元素（gt;0.5mmol\L） :N P L Ca Mg S 微量元素：Fe B Mn Zn Mo Cu Co Cl 37NH4NO31650 7KH2PO4170 ?MgSO .7H0 370 ?ZnSO4.7H2O 8.6 ?Na2MoO4.2H2O 0.25 ?CuSO4.5H2?CoCI2.6H2 1 2Vc、B、B6、B12、烟酸、生物素 3（水解酪蛋白，水解乳） （三）植物生长调节剂 用量很少，但对外植体生长和分化起决定作用。 影响最显著的是生长素和细胞分裂素。 生长素类： 种类：2,4-0： 2,4?二氯笨氧乙酸 NAA：蔡乙酸 IAA;卩引H朵乙酸 IBA」弭朵丁酸 生根 作用：诱导分生组织、胚状体产生、试管苗生根。 2、 细胞分裂素类： 种类：KT：激动素（糠基氨基卩票吟） 6-BA： 6■节基氨基瞟吟 ZT：玉米素 2-ip:2-异戊烯腺瞟吟 KT功效强于6-BA,但6?BA 作用：促进细胞分裂，由愈伤组织或器官分化出不定芽，促进芽的产 生。 3、 生长素\细胞分裂素比值和绝对含量控制植物组织的形态发生。 适中 生根细芽 低 （四）天然冇机添加剂 常用种类浓度：椰子乳10% 酵母提取液物05% 番茄汁：5%~10% 香蕉泥100^200mg\L 作用：提供微量营养成分，生理活性物质和生长素等。 （5） 琼脂：从海藻中提取，作凝固剂，不参与代谢。用量：0.6%-1.0% （6） 活性炭:用量:0?1%~0?5% 作用：吸附有害物质，使培养基变黑，有利于生根。 二、培养基种类和选择 不同植物、不同的培养部位和培养目的选择不同培养基 母液 琼脂大量元素 微量元素 铁盐 有机物 蔗糖 琼脂 加水加热溶解 调节ph值 水洗分装 封口 高压蒸汽灭菌 冷却备用 1、 配制母液的意义 提高工作效率，减小称量误差 （扩大10-100倍） 2、 母液配制原则: 相同类型的试剂混合； 易沉淀药品分开； 母液浓度要适当 认真计算和核量 准确称量 3、 配1升培养液用量二母液体积/扩大倍数 4、 微量元素母液： FeSO4与Na2?EDTA混合定容为1瓶，扩大倍数为100倍。 5、 生长调节物质母液 不溶于水，先溶于助溶剂 NAA、IAA、IBA、2、95%酒精，再加水定容。 KT和BAlmol\L盐酸中再加水定容。 60.1mg\L 或 lmg\L 71L培养基时应取的数量。 pH多数为5.6~6.0 pH高低会影响培养基硬度，pHlt;5.0,培养基不易凝固。 灭菌后，培养基的pH会降低0.2-0.3 培养基的分装： 分装量：容器大小不一，约一指厚即可 注意：不要把培养基粘到瓶口上，以免染菌，封好瓶口，准备灭菌。 四、培养基的灭菌和保存 消毒：用物理和化学的方法杀死物体表面的微生物（不包括细菌的芽 抱和真菌的砲子） 重要性：冷空气使锅内温度不一致，使底层温度达不到i2rc0 3、 过滤除菌 在高温下易分解的试剂，如C2A3、IAA、椰子汁等，用过滤除菌。过 滤孔径为0.45mm。 过滤器： 漏斗型，适用于大量液体过滤 注射器型，小量过滤 为加速过滤，可在漏斗下安装真空泵抽气， 需在超净工作台上进行，所有器皿事先灭菌。 过滤器先灭菌，灭菌温度不超过121°C 溶液先进行过滤 4、 培养基的保存 一般培养基冷却后即可使用。为保险起见，2-3d,如果没有杂菌污染 才使用。 生长旺盛的季节，也是取材的适宜时期。 幼嫩的纸条，茎尖，幼叶，幼穗较易培养。 材料大小：茎尖培养表明，材料越小，成活率越低，存活的临界大小 为：茎尖分生组织带片叶原基，大小约为0.2-0.3mmo 二、 外植体的消毒和接种 消毒剂的选择：消毒效果好，容易清洗掉或可自行分解，以免损伤材 料。 除材料表面气泡。 升Hg 三、 消毒步骤： 12、浸洗 3 在超净工作台上操作 将修整好的外植体放入一干净