2021分子生物学常用实验技术及方法.docx

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2021-03-02 发布于天津
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第二章常用实验技术及方法一聚合酶链反应反应总体积为讥其中含有模板缓冲液不含止溶液止卩引物引物聚合酶无菌去离子水加至上层用液体石蜡油覆盖循环参数为变性变性退火延伸共个循取环结束后取扩增产物经琼脂糖凝胶电泳在紫外检测仪上观察并拍照二基于技术的定点突变根据所要突变位点的特定氨基酸并按公认的四引物法原理分别设计上下游引物和这两条引物部分交错互补但分别含有欲突变后的碱基红点的互补序列如下图所示严用基因端的和扩增片段用基因端的和一起扩增片段反应条件基本如上七聚合酶链反应可根据具体实验略有调整反应完毕后分别电

第二章常用实验技术及方法一、聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）反应总体积为50讥其中含有：模板DNA 0.5 d PCR缓冲液（不含MgCl2） 5止 10XMgCl2 溶液 5止 dNTP (2.5 mmol/L) 0.5 1卩引物 1 (50 umol/L) 0.5 k 引物 2 (50 umol/L) 0.5 k Taq DNA 聚合酶 0.5 l 无菌去离子水加至 50 d 上层用25 d液体石蜡油覆盖。循环参数为： 94 °C变性10 min 94 C变性 1 min 56 C退火 1 min 72 C 延伸 2 min 共30个循