细菌鞭毛染色及活菌运动观察.doc

细菌鞭毛染色及活菌运动观察 ?实验目的 1、学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征 2、巩固显微镜操作技术及无菌操作技术 3、学习压滴法观察细菌运动性（活细胞） 实验原理 细菌鞭毛染色法的基本原理 鞭毛是细菌的运动“器官”，一般细菌的鞭毛都非常纤细，其直径为 0. 01—0. 02pm,在普通光学显微镜的分辨力限度以外，故需耍 用特殊的鞭毛染色法，才能看到。鞭毛染色是借媒染剂和染色剂的沉 淀作用，使染料堆积在鞭毛上，以加粗鞭毛的直径，同时使鞭毛着色, 在普通光学显微镜下能够看到。首先用媒染剂处理，使媒染剂附着在 鞭毛上使其加粗，然后用碱性复红（Gray氏染色法）、碱性复品红 （Leifson氏染色法）、硝酸银（West氏染色法）或结晶紫（Difco 氏染色法）进行染色 压滴法观察活菌运动的基本原理 鞭毛的功能相当于船的螺浆，在水中可以高速旋转从而推动菌体 前行，因此水体环境才是鞭毛细菌自由驰骋的天地。鞭毛的旋转速度 是非常快的，每秒钟旋转两百到一千多转，比一般的电动机要快得多。 鞭毛的高速旋转是由其附着于菌体上的基体旋转带动的，基体实际上 就是鞭毛的基部，它由一个屮轴套上两个或镶嵌固定在 就是鞭毛的基部，它由一个屮轴套上两个或 镶嵌固定在 细菌的体表（细胞膜和细胞壁）中，在科学家的眼中，基体简直就是 一台精巧的纳米机械一分子马达，但这个马达并不是靠电流驱动，而 是用伴随着细胞膜两侧质子梯度的消失产生的生物能量ATP来驱动， 鞭毛马达还可以转向（从反时针旋转变为顺时针旋转）从而使菌体发 生翻滚进而改变细菌的运动方向，事实上细菌在游动时也并不是单纯 地一直朝前游，而是伴随着不时的随机翻滚转向，但从表观上看仍表 现为细菌的前行。 细菌未染色时无色透明，在显微镜下主要靠细菌的折光率与周围 环境的不同来进行观察。若想观察的更加清晰，可以滴加稀释美兰等 染液进行染色，注意不要染色过重，以免影响观察，有鞭毛的细菌运 动活泼，且不同时向一个方向运动，而无鞭毛的细菌则呈不规则布朗 运动。这样便可以在光学显微镜下观察到细菌的运动。 实验器材 （-）菌种 枯草芽鞄杆菌（周生鞭毛）1?2d牛肉膏蛋白月东琼脂斜面培养物，铜 绿假单胞菌（端生鞭毛）l~2d牛肉膏蛋白月东琼脂斜面培养物等 （二） 溶液和试剂 质量分数为95%的乙醇一水溶液，蒸啊水，硝酸银染液A液和B液等 （三） 仪器和其它用品 酒精灯，载玻片，盖玻片，显微镜，双层瓶（内装香柏油和二甲苯）, 擦镜纸，接种环，小试管，烧杯，试管架，载玻片夹子，滴管和滤纸 等 四、实验步骤 1、 压滴法观察活菌运动 1） 洗片 用自来水和去污粉将载玻片清洗干净，然后用蒸谓水冲洗 2） 涂片 在载玻片的一端滴加一滴或半滴蒸憾水，采用无菌操作将所要观察的 菌种移动到水滴中少许（稍显浑浊即可），涂片完成 3） 加盖玻片 加盖玻片时首先使盖玻片的一端接触载玻片上的液滴的一端，然后再 将另一端缓缓放下，目的是防止气泡的产生，以免影响观察 4） 镜检（暗光） 由于菌体是放在蒸僻水中的，所以装片做好后要迅速镜检，以取得最 佳的观察效果，先用低倍镜找到图，再用油镜观察。 2、 细菌鞭毛染色 1） 洗片 用自来水和去污粉将载玻片清洗干净，然后用蒸憾水冲洗 2） 95%乙醇溶液浸泡 将洗好的载玻片放入盛有95%乙醇——水溶液的培养皿中，浸泡 3?5min后取出，放在酒精灯上烧，目的是将载玻片上的油污等洗掉 3） 涂片 在载玻片的一端滴加一滴或半滴蒸憾水，采用无菌操作将所要观察的 菌种移动到水滴中少许（稍显浑浊即可），将载玻片倾斜使液滴从载 玻片的一端流到另一端，然后用吸水纸吸取多余的液滴，涂片完成 4） 自然干燥 将载玻片倾斜放置，直至其干燥 5） 滴加硝酸银A液 向涂片上滴加适量的硝酸银A液，使其涂满载玻片，保持：T5分钟 6 ）水洗 将上一步中所滴加的硝酸银A液洗掉，注意防止将涂片中的菌种冲掉 7）硝酸银B液冲洗 用硝酸银染液B液洗去残留水分后,再滴加B液覆盖菌面数秒至1 mi m 其间可用微火加热， 8 ）水洗 当菌面出现明显褐色时，立即用蒸镭水冲洗。 9） 自然干燥（室温下） 10） 镜检 将做好的涂片放到显微镜下，以方便找到鞭毛（注：枯草杆菌的菌体 较大，为周生鞭毛，也可能会出现侧生鞭毛的现象，这是因为鞭毛断 掉；铜绿假单胞菌菌体较小，为端生鞭毛） 实验结果与分析 实验结果 实验结果分析 通过本次鞭毛染色实验，我认识到，以下几个方面决定了鞭毛染 色是否成功。 1、 染色用玻片干净无油污是鞭毛染色成功的先决条件。 2、 在盖玻片上接种的时候，只需要在水中轻轻地沾儿下即可，不要 用里过猛，更不能用接种环大幅涂开。若动作太重太大，菌种的鞭毛 就会被刮落。 3、 银染剂的使用方式和时间很重要。若时间过短或方式不当，就很 难在媒