细菌鞭毛染色及活细菌的运动性观察.doc

细菌鞭毛染色及活细菌的运动性观察 摘要：生长在某些细菌表面的纤细丝状运动器官，称为鞭毛。采用硝酸银染色法对枯草杆菌 和铜绿假单胞菌进行鞭毛染色，在光学显微镜下观察菌体形态和菌毛的长短、数量、着生位 置,得到清晰的结果。采用压滴法观察活细菌的运动性,对其运动情况有初步了解。 关键词：鞭毛染色 硝酸银染色法 压滴法 活细菌 1前言 1?1实验目的 1?学习并掌握鞭毛染色法，观察鞭毛的形态特征。 2.学习用压滴法观察活细菌的运动性。 1. 2实验原理 鞭毛是细菌的纤细丝状运动“器官”。鞭毛的有无、数量及着生力式也是细菌分类的重 要指标。鞭毛肓径一般为1030nm,只有丿IJ电镜才能肓接观察到。若要川普通光学显微镜观 察，必须使用鞭毛染色法。 鞭毛染色的基木原理是在染色前先用媒染剂处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然 后用碱性复红（Gray氏染色法）、碱性父品红（Leifs。n氏染色法）、硝酸银（West氏染色 法）或结晶紫（D辻。氏染色法）进行染色。木实验采用的是硝酸银染色法。 在显微镜下观察细菌的运动性，也可以初步判断细菌是否冇鞭毛。细菌运动性的观察可 用压滴法和悬滴法。观察时，要适当减弱光强度以增加反并，若光线太强.细菌和周I科的液 体难以区分。 2材料与方法 2. 1实验器材 2.1.1菌种 枯草芽砲杆菌牛肉膏蛋白脉琼脂斜面培养物，铜绿假单胞菌牛肉膏蛋白腺琼脂斜血培养物。 2.1. 2溶液和试剂 硝酸银鞭毛染液,0.01%美兰水溶液,香柏油，二甲苯，体积分数95%的乙醇。 2.1?3仪器和其他用品 酒精灯，载玻片，盖玻片，显微镜，擦镜纸，接种环，银了，记号笔，滴管和无菌水等。 2. 2实验步骤 2.2.1压滴法 步骤 内容 备注 1 涂片：在洁净的载玻片中间滴加一滴无菌水，挑取 一环枯草杆菌液与水棍合。 取菌的操作应在酒耕灯附近进行。 2 滴加一滴0.01%美兰水溶液，混匀。 染液不要滴加太多。 3 加盖玻片：用银子夹一洁净的盖玻片，先使其一边 接触菌液，然后缓缓地放下盖玻片，防I上产生气泡。  4 迅速镜检：将光线适当调暗，先川低倍镜找到标本， 再用高倍镜观察，也可用油镜观察。 注意区分细菌的鞭毛运动和水的 流动，后者细菌的位移朝同一方 向,只有细菌有明显位移且方向不 同时，才能判定为有运动性。 222鞭毛染色（硝酸银染色法） 步 骤 内容 备注 1 清洗玻片：将载玻片用去污粉清洗干净后，置于95%乙醇 中浸泡5分钟，然后取出在酒精灯火焰丄烧去酒精及可能 残留的油迹。 2 涂片：在洁净的载玻片中一端滴加一滴无菌水,用接种环 挑取一环菌种，与水混合均匀。立即倾斜玻片，使菌悬液 缓慢流向另一端，用吸水纸吸去多余菌悬液，白然干燥。 取菌后的接种环在玻片的熬 馆水中轻轻沾几下即可，不要 用力过猛，更不能将接种环大 幅度涂开，以免鞭毛脱落。 3 染色： 滴加硝酸银染液A液，染3~5分钟； 用熬馆水充分洗去A液： 用硝酸银染液B洗去残水后，再滴加B液覆盖菌面 30~40s,可用酒精灯微火稍微加热至菌面显褐色； 立即用蒸馆水冲洗，自然干燥。 A染液染3~5分钟后，用蒸缁 水冲洗是要充分，以免背景很 脏，鞭毛不易被观察到。 4 镜检：先低倍，后高倍，最后用油镜观察。 3结果与分析 3.1压滴法 用压滴法观察枯草杆菌的运动性，盖上盖玻片立即观察时，可以看到浅蓝色的细菌细胞。 盖玻片下里液体流动较明显，菌体随水流运动，运动方向较统一且呈直线状。待液体稍蒸发, 盖玻片下液体充分但不流动时观察，细菌的运动朝不同的方向，运动过程屮可转弯；有些细 菌在原地左右摆动，应为布朗运动。压滴法检杳细菌的运动性来判断鞭毛的有无快速、简洁, 但受操作和滴加美兰试剂的量煤响校大。 3?2鞭毛染色实验结果（见下表，附图） 鞭毛染色实验结果 菌种菌体颜色菌体形态 菌种 菌体颜色 菌体形态 枯草杆菌 深褐色 杆状，单生或 形成短链 铜绿假单胞 菌 深褐色 直或稍弯，两 端钝圆的杆 菌，单生 鞭毛颜色 鞭毛分布 鞭毛数量 褐色 菌体细胞表 面，为周生鞭 毛 很多根 浅褐色 菌体的一端， 为端工鞭毛 1?3根 图1鞭毛染色后的枯草杆菌标准菌（ 图1鞭毛染色后的枯草杆菌标准菌（10X100） 图2鞭毛染色后的铜绿假单胞杆菌标准菌（10X100） 3.3实验分析 细菌鞭毛染色的影响因素很多，主要在于以下方面： 1） 菌种的选择：细菌的鞭毛应多而长，易于观察，另外要选取活跃生长期的菌种进行鞭毛 染色，老龄菌体活动度降低，鞭毛易脱落。 2） 载波片的洁净程度：载玻片必须清洁、光滑、无汕迹，否则菌液不能散开，造成菌体堆 积，鞭毛相互纠缠而难以看清，而且染色后背景脏乱。 3） 制片过稈屮条件要温和，不能剧烈丧荡、涂抹菌液，可以用酒精灯微火稍微固定，但必 须保证温度不要过高，以免菌毛脱