细菌生化反应培养基.doc

细菌生化反应培养基 录入时间:2010-7-29 10:18:33来源：中国药典 卜列各类培养基常用丁测定细菌的糖类代谢试验、氨基酸和蛋口质代谢试 验、碳源和氮源利用试验等生化反应。 1.糖、醇发酵培养基 （1）成分 基础液 蛋白腺 10ml 氯化钠 5g 0. 5%酸性品红指示液 10ml （或0.4%浪麝香草酚蓝指示液）（6 ml ） 水 1000ml 糖、醇类 每100ml基础液内各加0.5g （2） 制法 取蛋白腺和氯化钠加入水中，微温使溶解，调pH值使灭菌后为7. 3±0. 1, 加入指示液混匀。每100ml分别加人1种糖、醇或糖苜，混匀后分装于小管屮 （若需观察产气反应，在小管内另放置杜汉小倒管）。于116 °C灭菌15分钟。 常用的糖、醇或糖昔：阿拉们糖、木糖、鼠李糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、 半乳糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、蕈糖、纤维二糖、蜜二搪、棉子糖、松三糖、菊 糖、糊精、淀粉、甘露醇、卫矛醇、山梨醇、肌醇、甘油、水杨素、七叶甘等。 （3） 用途 鉴别各种细菌对糖类的发酵生化反应，发酵者产酸，培养基变色（加酸性 品红者由无色至红色或再至黄色；加渙麝香草酚蓝者由蓝色至黄色）；产气吋， 小倒管内有小气泡。 2?七叶昔培养基 （1）成分 蛋白豚 5g 七叶昔 3g 磷酸氢二钾 水 1000ml 枸椽酸铁 (2 )制法 0. 5g 除七叶昔外，取上述成分混合，微温使溶解，加入七叶昔混匀，调pH值 使灭菌后为7. 3 ±0. 1,分装于试管P，121 °C灭菌15分钟。 (3 )用途 用于鉴别细菌对七叶昔的水解试验，产生棕黑色沉淀为阳性反应。 3?磷酸盐葡萄糖陈水培养基 (1)成分 蛋白腺 7g 葡萄糖 5g 磷酸氢二钾 3. 8g 水 1000ml (2 )制法 取上述成分混合，微温使溶解，调pll值使灭菌后为7.3 ±0.1, 分装于小试管中，121 °C灭菌15分钟。 (3)用途 用于鉴别细菌的甲基红试验(M-R反应)和乙酰甲基甲醇试验(V-P 反应)。 1甲基红试验(M-R反应)取可疑菌落或斜面培养物，接种于磷酸盐葡萄 糖豚水培养基屮，置35 °C培养2?5天，于培养管内加人甲基红指示液(称 取甲基红0. lg,加95 %乙醇300ml,使溶解后，加水至500ml)数滴，立即观 察，呈鲜红色或橘红色为阳性，呈黃色为阴性。 2乙酰甲基甲醇生成试验(V-P反应) 取可疑菌落或斜而培养物，接种 于磷酸盐葡萄糖月东水培养基屮，置35 °C培养48小时，量取2ml培养液，加 入ci-蔡酚乙醇试液(称取Q —蔡酚5g ,加无水乙醇溶解使成100ml ) 1ml ,混 匀，再加40%氢氧化钾溶液0.4ml ,充分振摇，立刻或数分钟内出现红色，即 为阳性反应；无红色反应为阴性，如为阴性反应，置35 °C水浴4小吋后再观 察。 4?蛋白腺水培养基 (1 )成分 蛋白月东 10g 水 1000ml 氯化钠 5g (2 )制法 取上述成分混合，微温使溶解，调pll值使灭菌后为7. 3 ±0.1, 分装于小试管，121 °C灭菌15分钟。 (3 )H1途 用于鉴别细菌能否分解色氨酸而产生靛基质的生化反应。 ①靛基质试验取可疑菌落或斜而培养物，接种丁蛋口腺水培养基小，置 35 °C培养24?48小时，必要时培养4?5天,沿管壁加人靛基质试液数滴， 液面呈玫瑰红色为阳性，呈试剂本色为阴性。 ② 靛基质试液 称取对二甲氨基苯甲醛5g ,加入戊醇(或异戊醇) 75ml ,充分振摇，使完全溶解后，再取盐酸25ml徐徐滴入，边加边振摇，以 免骤热导致溶液色泽变深.或称取对二甲氨基苯甲醛lg ,加人95 %乙醇95ml , 充分振摇，使完全溶解后，再取盐酸20ml徐徐滴入。 5?三糖铁琼脂培养基 (1 )成分 蛋白腺 20g 硫酸亚铁 0. 2g 牛肉浸岀粉 5g 硫代硫酸钠 0. 2g 乳糖 10g 002%酚磺醮指示液 12. 5ml 蔗糖 10g 琼脂 12 ?15g 葡萄糖 lg 水 1000ml 氯化钠 5g (2 )制法 除乳糖、蔗糖、葡萄糖、指示液、琼脂外，取上述成分，混合， 加热使溶解，调pH值使灭菌后为7. 3 ±0.1,加入琼脂，加热溶胀后，再加 入其余成分，摇匀，分装，121 °C灭菌15分钟，制成高底层(2?3cm )短 斜面。 (3 )用途 用丁初步鉴别肠杆菌科细菌对糖类的发酵反应和产生硫化氢试验。 方法和结果观察：取可疑菌落或斜面培养物，做高层穿刺和斜面划线接种， 置35 °C培养24?48小吋，观察结果。培养基底层变-黄色为葡萄糖发酵阳性, 斜面层变黃色为乳糖、蔗糖发酵阳性;底层或整个培养基呈黑色表示产牛硫化氢。 6.克氏双糖铁琼脂培养基 (1)成分 蛋白豚 20g 枸椽酸铁 0. 3g 牛肉浸粉 3g 硫代硫酸钠 0.