生物化学：蛋白质小结.ppt

蛋白质小结 蛋白质的基本组成单位——氨基酸 结构；分类——R基团（4类） 性质 紫外吸收280nm（Trp，Tyr，Phe） 两性→pI 茚三酮反应（蓝色，570nm）——鉴定 甲醛反应——滴定 N端反应 FDNB PITC DNS-Cl 分离鉴定 纸层析 离子交换层析 蛋白质的结构 一级结构：肽键→肽链-骨架→特性；二硫键 一级结构测定: N端分析：Sanger(FDNB)， Edman(PITC)，DNS-Cl C端分析：羧肽酶法 (羧肽酶 A,羧肽酶 B)，肼解法 二硫键拆分：过甲酸氧化法；还原法 肽链的部分水解：溴化氰(CNBr)法；酶法(胰蛋白酶,胰凝乳蛋白酶,胃蛋白酶) 高级结构 二级结构：氢键-主链结构； 肽平面：α-螺旋；β-折叠； β-转角；无规卷曲 纤维状蛋白：角蛋白 α-角蛋白:α-螺旋→初原纤维；弹性，刚性 β-角蛋白: β-折叠→片层(Gly，Ala);抗张 胶原蛋白：Pro,Lys；羟化；左旋单链→原胶原→ 胶原纤维（氢键、共价交联、二硫键） 超二级结构和结构域 三级结构：次级键（氢键、离子键、疏水相互作用、范德华 力）；二硫键→所有原子空间构象 四级结构：次级键；亚基间相互作用 结构与功能 一级结构与功能： 核糖核酸酶——一级结构决定空间结构 细胞色素C——一级结构差异与进化 血红蛋白——一级结构直接影响蛋白功能，分子病 空间结构域功能： 胰岛素——二硫键定位-空间结构 血红蛋白与肌红蛋白——空间结构相似-功能；亚基间相互作用 抗体——一级结构-空间结构；结构域-功能定位 理化性质与分离分析 胶体性质：颗粒表面电荷，水化膜；透析 两性性质和等电点 变性与复性：因素、条件、结果 沉淀：可逆、不可逆 沉淀分离：等电点沉淀、盐析、有机溶剂沉淀 色谱纯化：凝胶过滤、离子交换、亲和层析 检测：280nm；茚三酮；电泳（SDS，SDS-IEF） * *