胡萝卜愈伤组织培养论文.doc

胡萝卜愈伤组织的诱导 摘要：植物组织培养的基础是利用细胞的全能性即指已经分化了的细胞仍然具 有发育成完整个体的潜能，植物组织培养不仅能使处于分牛状态的细胞继续保持 分生能力，同吋也可以使成熟组织屮的细胞恢复分裂能力。了解胡萝卜的植物组 织培养的基本概念、基本原理和操作方法知道分化的植物细胞仍具有形成完整植 株所需要的全部基因。胡萝卜的植物组织培养主要研究不同的植物生长调节剂 (2,4-D、6-BA)对胡萝卜脱分化形成愈伤组织速度的影响。实验表明在母液屮加 入 6-BA (0. 5mg/L) + 2, 4-D(l. Omg/L)的不如单独加入 2, 44)(2. 2 mg/L)形成愈伤 组织的速度快，效果好。 关键词：胡萝卜；分化；愈伤组织；诱导 一、引言 植物组织培养新技术在快繁脱毒、育种、种质资源保存、次生代谢物提取、 基因转化等方面有着良好的前景以及研究热点。在植物育种上的应用：单倍体育 种，离体胚培养和体外受精，细胞融合，基因转化，培养细胞突变体、在植物脱 毒和快速繁殖上、在人工种子和种质保存方面、在提取植物次生产物生产丄、在 植物免疫方面的皆能有其应用。在组织培养过程屮，常会遇到-些问题使实验无 法进行下去，甚至导致整个实验的失败，给科研和牛产造成损失。如培养过程屮 的污染，褐变和玻璃化是组织培养屮公认的三大难题。 胡萝卜营养价值高，及其适于生食、加工、烹调等多种用途，在世界范围内广 泛栽培。从20世纪初到近几年，胡萝卜一直是科研人员的主要研究对象。20世 纪50年代末Saward等人从胡萝卜根的韧皮部取下一块组织，并将它置于液体培 养基屮进行培养，使它分化出愈伤组织，然后把从愈伤组织所得到的胚状体转移 到固体培养基上继续培养，获得了完整的胡萝卜试管植株。同一基因型的不同外 植体其愈伤组织的发生能力有明显差并，这与不同外植体的分化程度和脱分化能 力不同有关。近年来的研究表明，以胡萝卜下胚轴为外植体出愈率要高于子叶和 贮藏根。 培养方法： 1、 非试管微组织快繁 非试管微组织快繁技术是将外植体（一般耍求带一叶一芽）放置在室内外普通沙 子培养基上进行培养，利用植物腋芽自然倍壇达到快速繁殖的H的。一般植物 7?15天可以生长出根系。此技术投资低，操作环节少。 2、 试管组织培养 试管组织培养是将外植体（即离体组织、器官或细胞）放置在组培瓶等器皿屮在 无菌的条件下进行组织培养获得组培瓶苗。不同的激索种类、浓度及其组合对愈 伤组织的诱导率有显著影响。在培养基屮加入2, 4-D, 6-BA, BA, KT等，会影响胚 性愈伤组织的发生。 由于条件有限，我们选取的是第二种方法。 植物组织培养首先不仅可以生产大量良性系，而且可以获得人类需要的多种代谢 物质；其次，细胞融合可打破种属间的界限，客服远缘杂交不亲和性障碍，在植 物新品种的培养和种性的改良屮发挥着巨大的作用；再次，还可获得单倍体，三 倍体及其他多倍体，菲整倍体;最后，组织培养的植物细胞液成为在细胞水平上 分析研究的理想材料。 材料和方法 （―）试剂器材 实验材料：胡萝卜直根。 试剂：MS培养基，2, 4-D, 6-BA,无菌水，70%酒精，5%次氯酸钠;溶液，吐温 器材：耗材：培养皿，锥形瓶，棕色试剂瓶，滤纸，银子，解剖刀，烧杯，量 筒，玻璃棒，酒精灯，移液管，移液枪，容量瓶，离心管。 仪器：超净台，高压灭菌锅，pH测定仪。 （-）方法 MS培养基的配制（1L） 母液I , MS扩大200倍定容于250ml容量瓶屮，配1L培养基取5ml。 H3BO3 0.3 lg KH2PO4 5g  KI 0.0415g Na2MoO4-2H2O 0.0125g CoC12-6H2O 0.00125g 母液II, MS扩大200倍定容于250ml容量瓶中,配1L培养基取5ml。 MgSO4-7H2O 18.5g MnSO4H2O 0.845g ZnSO4-7H2O 0.43g CuSO4-5H2O 0.00125g 母液III , MS扩人20()倍定容于250ml容量瓶屮，用棕色试剂瓶装。配1L培养 基取5mlo Na2-EDTA?2H2O 1.865g FeSO4-7H2O 1.39g 母液IV, MS扩大40倍定容于250ml容量瓶屮，配1L培养基取25ml。 KNO3 19g 母液V, MS扩大40倍定容于250ml容量瓶屮，配1L培养基取25ml。 NH4NO3 16.5g 母液VI, MS扩大40倍定容于250ml容量瓶屮，配1L培养基取25ml。 3.3224g无水CaCl2 3.3224g 其他有机物母液: 称取量(g) 定容到(ml) 浓度(mg/ml) 配IL培养基用量(ml) 肌醇 10 100 100 1 烟酸 0.05 100 0.5 1 vb6 0.05 10