法学紫外可见分光光谱法.pptxVIP

紫外-可见分光光度法是根据物质的分子或离子对紫外-可见光谱区（200～760nm）的吸收来研究物质的组成、含量和结构的方法。; 作用： 定性上不仅可以鉴别具有不同官能团和化学结构的不同化合物，而且可以鉴别结构相似的不同化合物。;;一、电磁辐射和电磁波谱;波长为200nm的 光，一个光子的能量是：;?电磁波谱的有关参数;三、吸收光谱法和发射光谱法 ;例：原子发射光谱法、原子荧光光谱法、分子 荧光光谱法和磷光光谱法;1.分子光谱的产生;2．分子吸收光谱的分类： 分子内运动涉及三种跃迁能级，所需能量大小顺序 ; 吸收光谱（吸收曲线）：以波长λ（nm）为横坐标，以吸光度A（或透光率T）为纵坐标所描绘的曲线。;三、紫外-可见吸收光谱与分子结构的关系 ;;图4-3 分子中价电子能级及跃迁示意图; 芦丁含量测定;1.σ→σ*：一般发生在远紫外线区，饱和烃类C-C键;3. n→σ*：发生在远、近紫外线区之间 150nm~250nm C—X键，X—S、N、O、Cl、Br、I 等杂原子;5.电荷迁移跃迁 ;(二) 吸收带及其与分子结构的关系;B带：由π→ π*跃迁产生 芳香族化合物的主要特征吸收带 λmax =254nm，宽带，具有精细结构；εmax=200 极性溶剂中，或苯环连有取代基，其精细结构消失;;; 电荷转移吸收带：某些无机物和某些有机物混合 而得的分子配合物，在外来辐射激发下强烈吸收 紫外光或可见光，从而获得的可见或紫外吸收带。 乙醇中，将醌与氢醌混合，暗绿色的醌氢醌结晶， 吸收峰在可见光区;四、Lamber-Beer定律（吸收光谱法基本定律);设断层中所含吸光质点数为dn，不让光子通过的面积ds ;截面积S与体积V，质点总数n与浓度c： ;A＝－ lgT ＝ － lg（ I / I0)=Ecl;吸光度与透射率;3. Lamber-Beer定律;4 . 吸光系数：定性定量的依据; 讨论： 1）不同物质在同一波长下k可能不同（选择性吸收） 2）溶剂不同，同一物质k可能不同。应注明溶剂。 3）k↑，物质对光吸收能力↑, 定量测定灵敏度↑ → 定性、定量依据; 例1 某溶液用2cm吸收池测量时，T=60%，若改用1cm和3cm吸收池，T和A为多少。;解;(六) 偏离Beer定律的因素; （1）光学因素 ;２. 化学因??　　稀溶液;第二节 紫外-可见分光光度计;;光源（辐射源）; 吸收池:盛放样品溶液的容器 可见光区-玻璃吸收池 紫外光区-石英吸收池 常用1cm的吸收池; 检测器：检测光信号，即将光信号转变为电信号 ;二、 紫外-可见分光光度计仪器的类型;2.单波长双光束分光光度计;3. 双波长分光光度计;一、溶剂的选择;溶剂的极性效应;;;（二）显色条件的选择;;;（三）透光率测量误差;;第四节 定性及定量分析 ;1．对比吸收光谱的特征值;2．对比吸光度或吸光系数的比值：;3．对比吸收光谱的一致性;二、定量分析;2．标准曲线法;; 芦丁含量测定;3．对照法：外标一点法;例： 维生素B12的含量测定 精密吸取B12注射液2.50mL，加水稀释至10.00mL；另配制对照液，精密称定对照品25.00mg，加水稀释至1000mL。在361nm处，用1cm吸收池，分别测定吸光度为0.508和0.518，求B12注射液的浓度。;（二）多组分的定量方法;2．两组分吸收光谱部分重叠 λ1→测A1→b组分不干扰→可按单组分定量测Ca λ2→测A2→a组分干扰→不能按单组分定量测Cb;3．等吸收双波长法;消去b的影响测a ;例： 有一A和B两化合物混合液，已知A在波长处282nm和238nm处的百分吸光系数值分别为720和270；而B在上述两波长处吸光度相等。现把A和B混合液盛于1.0cm的吸收池中，测得在282nm处的吸光度0.442，在238nm处的吸光度为0.278，求A化合物的浓度。（mg/100ml）;1.σ→σ*：一般发生在远紫外线区，饱和烃类C-C键;5.电荷迁移跃迁 ;吸光度与透射率;3. 双波长分光光度计;;; 芦丁含量测定;消去b的影响测a