食品分析技术项目六6.双缩脲法测蛋白质（实训）.ppt

“ ” “ ” 项目六 双缩脲法测蛋白质 实验目的 学习掌握双缩脲法测定蛋白质含量。 了解其它一些蛋白质定量方法。 实验原理 具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩脲反应。 在碱性溶液中双缩脲与铜离子结合形成复杂的紫红色复合物，而蛋白质及多肽的肽键与双缩脲的结构类似，也能与铜离子在在碱性环境中形成紫红色复合物，其最大光吸收在540nm。 在一定浓度范围内，蛋白质浓度与双缩脲反应所呈颜色深浅成正比，可用比色法定量测定。 双缩脲法——仪器 双缩脲法——试剂 1. 标准曲线的绘制 取6支干燥洁净比色管编号，按下表加入下列试剂： 采用标准曲线法，即A540(540nm吸光度值)为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。? 加入物（ml） 0 1 2 3 4 5 标准蛋白液/ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蛋白浓度/(mg/ml) 0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 蒸馏水/ml 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0 双缩脲试剂/ml 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 充分混匀后，室温下（20—25℃）放置30min A540 双缩脲法——操作步骤1 2．样品测定 取2支试管，加入待测样品液各1mL，加入双缩脲试剂4mL，室温下（20—25℃）放置30min，用分光光度计测定吸光度。 3.结果计算 将测得的吸光度代入标准曲线的回归方程，求得未知样品的蛋白质浓度。以mg/mL 计。? 双缩脲法——操作步骤2 1、简写出实验目的、原理 2、作出标准曲线图并得出标准曲线和相关系数。 3、计算未知蛋白液的浓度。 4、写出实验注意事项与讨论 （注意：一定要把原始数据填入原始数据栏） 双缩脲法——检测报告 “ ” “ ”