5.5 离体小肠平滑肌的生理特性.pdf

离体小肠平滑肌的生理特性 [实验原理] 如果将家兔的小肠平滑肌离体，放置在各种化学成分、渗透压、 pH、温度以及气体供应等因子接近机体的内环境溶液中，可保持 离体小肠长时间地存活下来，并可以观察到小肠的各种运动形式。 通过用台氏液做灌流液，将小肠段的一端固定 ，另一端连张力 换能器 ，即可通过一定的记录装置记录下离体小肠平滑肌的收缩 曲线。 [实验目的] ◆ 学习离体小肠平滑肌灌流的实验方法； ◆ 观察各种因素对离体小肠平滑肌运动的影响； ◆ 能够运用理论知识解释神经和体液因素对胃肠道运动的调节 机制 。 [实验动物] 兔 [实验药品] 2%戊巴比妥钠，台式液，10-4肾上腺素（Ad ），10-4乙酰 胆碱（Ach ），0.9%生理盐水，1%CaCl , 1mol/L HCL ， 2 1mol/L NaOH等 [仪器与器械] 兔手术台，哺乳动物手术器械，纱布，细线，滴管，注 射器，恒温平滑肌浴槽 ，计算机生物信号采集处理系统，张 力换能器 ，万能支架，双凹夹、小烧杯等。 [实验步骤] 1. 标本的制备 剪取一段20~30cm的十二指肠 ，在台式液中轻轻漂洗， 用注射器向肠腔内注入台式液冲洗肠腔内壁，并置于低温台 式液中备用。实验时将肠管剪成2~3cm肠段，用棉线结扎肠 段两端，准备上机操作进行离体小肠平滑肌的实验。 2. 标本的连接 用棉线结扎肠段两端，将一 端结扎线连于张力换能器，适当 调节换能器的高度，使其与标本 之间松紧度合适。 注意连线必须垂直 ，并且不能 与浴槽壁接触，避免摩擦。 3.连接仪器 张力换能器输入端与系 统的一个通道相连，进入 计算机生物信号采集处理 系统，选择“离体小肠平 滑肌的生理特性”实验项 目 ，开始实验项目的观察。 4. 实验项目观察 （1 ）观察离体小肠平滑肌的正常运动曲线； （2 ）降低温度（38 ℃-25℃）后，观察运动曲线的变化； -4 （3 ）滴加10 Ach ，观察运动曲线的变化； -4 （4 ）滴加10 Ad ，观察运动曲线的变化； （5 ）滴加1MHCl ，观察运动曲线的变化 ； （6 ）滴加1MNaOH ，观察运动曲线的变化 ； （7 ）滴加1%CaCl 观察运动曲线的变化 。 2 ， 5 实验结果讨论分析 （1 ）25℃灌流液 收缩频率下降，幅度开始有所↑ ，但时间长了又↓。 改成38℃灌流液 ，收缩频率及幅度逐渐↑。 现已证明，适当的温度降低，平滑肌内[ Ca2+]因而收缩力↑ ，但长时 间的低温，因酶的活性↓ ，各种离子通道蛋白活性也↓ ，收缩力↓。温度恢复 到38℃酶及离子通道蛋白活性恢复，收缩力恢复。如果温度过高，会因蛋 白质变性收缩力又会下降。 （2 ）加入1~2滴 10-4Ach后，收缩频率及幅度↑。 Ach与M受体结合，电压门控Ca2+通道及化学门控 Ca2+通道开放Ca2+内流↑ ，细胞内[Ca2+]↑ ，继发引起细 2+ ， 2+ 胞内cGMP↑, cGMP促进肌质网释放Ca 细胞内[Ca ] 进一步↑ ，肌肉收缩力↑ （3 ）加入1~2滴 10-4 Ad后，收缩频率及幅度↓。 + Ad激活α受体,使K 外流↑ ，膜发生超极化 ，兴奋 性↓ ；还激活β受体 ，使cAMP↑ ，肌膜和肌质网上泵活 2+ + 2+ 动↑ ，细胞内[C