1.2.2 鲫麻醉与采血.pdf

鲫麻醉与采血 1 鱼类血液是重要的组织 ◼ 血液生理生化指标可以反 映出鱼类的生理状态 ◼ 常用于水产科学研究 鱼类血液采集方法 可以通过断尾、心脏、动脉或静脉血管进行鱼类血液的 采集  为了最大限度地保证实验鱼类的存活和血液样品的 质量 ，我们一般会采用直接血管采血法 ，从尾动脉 或尾静脉利用注射器进行采血 ，通过采血器负压将 血管内的血液抽取到采血管中。 鱼类血液采集步骤 • 实验前准备 • 采血过程 • 血浆与血清制备 • 试剂与器械介绍 （麻醉剂、注射器、采血管） • 鱼类的麻醉 ➢在采血前 ，我们将麻醉剂放 入水中溶解 ，麻醉剂的浓度 在100mg/L左右。 ➢若研究需要 ，不能对鱼类进 行麻醉 ，应该采用有效的方 法禁止鱼类在采血时的活动 ， 以免影响采血效果。 经血管采血 ➢将麻醉好的鱼取出 ，擦干体 表液体 ，把鱼侧放在垫布上。 ➢剔除臀鳍上方的侧线处的鳞 片 ，紧贴侧线下将针头插入 肌肉内 ，将针刺入抵达脊椎 下动脉中 ，轻拉注射器活塞 ， 造成针管内负压。 ➢调整位置采集血液。一旦有血 液进入采血管中 ，维持采血姿 势不变 ，以免因抖动而使针头 游移出血管 ，导致采集不到血 液。 ➢待采集到合适血量后 ，拔出针 头。将采集到的血液分别注入 到抗凝管与非抗凝管中 ，混匀 后放置在试管架上 ，室温放置 1小时后离心。 断尾采血 ➢ 鲫鱼麻醉后 ，擦干体表水分和粘液 ， 将臀鳍后缘垂直于侧线方向的一圈 鳞片剔出。 ➢ 鱼头朝上 ，露出尾柄 ，用手拉住尾 鳍 ，然后用粗剪刀从鳞片剔出处将 尾柄剪断 ，这时从体轴中心处即可 流出血液。 ➢ 用涂有肝素的表面皿盛接。在接血 的同时 ，缓慢晃动表面皿 ，使血液 与肝素充分混匀 ，防止凝血。 ➢采血时要注意防止体表残留水分、粘液或者鳞片等混入 所采集的血液中以免污染血液样品；在剪断尾鳍后 ，血 液涌出较迅速 ，要及时收集 ，以免拖延时间造成采血量 不足； ➢若流血不畅 ，则可轻轻按摸躯体加速血液流动 ，仍可取 到数滴血。或者 ，也可以利用毛细采血管直接从出血点 采集血液。 ◼ 血浆的制备 ◼ 将抗凝采血管放入离心机中， 以3500转/分钟的转度离心10 分钟。离心完毕后，轻轻取出 采血管。 ◼ 澄清透明的上清液即为血浆。 ◼ 将血浆转入PE管中，保存备用。 ◼ 血清的制备 ◼ 将静置分层的非抗凝管放入离心 机中，以1000转/分钟的转速离 心30min。 ◼ 离心完毕后，轻轻取出采血管。 ◼ 澄清透明的上清液即为血清。 ◼ 将血清转入PE管中，保存备用。 鲫麻醉与采血 13