3.5 血细胞计数动物繁殖学.pdf

血细胞计数 [实验原理] 血液中血细胞数很多，无法直接计数，需要将血 液稀释到一定倍数，然后再用血细胞计数板，在显微 镜下计数一定容积的稀释血液中的红、白细胞数量， 最后将之换算成每升血液中所含的红、白细胞数。 [实验目的] 掌握应用稀释法计数红细胞和白细胞的方法。 [实验药品] 0.9%NaCL溶液（红细胞稀释液）、 1.5%冰HAC溶液（白细胞稀释液）。 [仪器与器械] 显微镜、电脑、血细胞计数板、小试管、试管架、微量采血管、 1mL、5mL移液管、盖玻片、滤纸等。 [实验步骤] 1. 血液的稀释 取10 μL血液加入2 mL红细胞稀释液中 取10 μL血液加入0.19 mL白细胞稀释液中,混匀。 2. 熟悉血细胞计数板 常用的血细胞计数板是改良 式牛鲍尔计数板，为优质厚 玻璃制成。 呈长方形，由 “H”型凹槽分为2个计数室。 每个计数室分为9个大正方格， 每个大格边长为1mm ，计数室 的底与盖玻片间的距离为0.1mm ， 及每大格的容积为： 3 1mm1mm0.1mm=0.1mm 。 四角的每个大格被分为16个中格； 中央的大格被分为25个中格，中 央的每个中格又被分为16个小格。 3.充池（布血） 取1张血细胞计数板及1张盖玻片，用布将盖玻片擦净，把 盖玻片盖在血细胞计数板槽上，然后用吸管将制备好的血细 胞悬液混匀，吸取血细胞悬液，滴1滴于血细胞计数板的盖玻 片一侧边缘 ，使细胞悬液自然流入计数室内。 注意血细胞悬液不可滴的过多，如溢出或盖玻片内有气泡 必须重做，否则将影响计数结果。该吸管加完样后不能再用。 4. 计数 于高倍镜下计数中间大方格内四角及中央的5个中方格 内RBC总数。或四周四个大方格内的WBC数。如果细胞 压边线，则按数上不数下，数左不数右原则进行。如果各 中方格内的RBC数相差20个以上，四周各大方格内的 WBC数相差8个以上，则说明血细胞分布不均匀，需振 荡稀释液，重新充池（布血）。 5. 计算 （1 ）红细胞： -1 6 10 红细胞数·L =N/5·25·200·10·10 = N·10 N ：五个中方格的RBC总数 ； N/5·25 ：中央大方格RBC总数 N/5·25·10 ：1mm3 （uL ）RBC总数 N/5·25·10·106 ：1L的RBC总数 200 ：为血液稀释倍数。 （2 ）白细胞: -1 6 7 白细胞数·L =A/4·20·10·10 = N·5·10 A ：表示4个大方格内数得的WBC数； A/4: 换算成每个大方格内的WBC数； 10 ：将一个大方格内WBC数换算为1μl血液内WBC数。 6 6 10 ：1L=10 μL。 20 ：为血液稀释倍数。 6. 器械洗涤 血细胞计数板只能用清水浸泡、冲洗和蒸馏水漂 洗，然后以丝绢轻轻拭净（或滤纸吸干）。 注意事项  吸取血液时，采血管中不得有气泡,吸血和稀释液的体积一 定要准确。  计数时，显微镜要放稳，载物台应置水平位，不得倾斜。一 般在暗光下计数的效果较好。计数池内的细胞分布要均匀， 各中方格的细胞相差不应超过 ±10% ，否则重新计数。