生物产品分析与检验技术葡萄糖酸测定葡萄糖酸的分析与检验-高碘酸氧化法.pptx

《生物产品的分析与检验》 有机酸的分析与检验 -----葡萄糖酸的分析与测定 主讲教师：张 惠 一、葡萄糖酸的性质与结构 （一）性质 葡萄糖酸，又名D-葡萄糖酸，醛糖酸，是葡萄糖的醛基经氧化生成的糖酸； 葡萄糖酸天然存在于水果、蜂蜜、红酒和红茶菌中。 弱酸性，可溶于水，微溶于乙醇，不溶于乙醚和大多数有机溶剂。 用作蛋白凝固剂、食品防腐剂和食品酸度调节剂；用于生产葡萄糖酸盐，如葡萄糖酸钠、葡萄糖酸钾、葡萄糖酸钙、葡萄糖酸镁、葡萄糖酸锌等。 一、葡萄糖酸的性质与结构 （二）化学式为C6H12O7，分子量为196.1566，结构式如下： 二、葡萄糖酸含量的测定-高碘酸氧化法------ 用高碘酸氧化法测定发酵液中葡萄糖酸含量 （一）测定原理 葡萄糖酸经过高碘酸氧化后生成甲醛。 CH2OH(CHOH)4COOH+4HIO4=HCHO+3HCOOH+CHOCOOH+H2O+4HIO3 过剩的HIO4 和生成的HIO3用NaHSO3溶液还原。 4HIO3+14H2SO3 4I+14H2SO4+2H2O 2HIO3+5H2SO3 2I+5H2SO4+ H2O 最初游离出来的碘液将液体染色成黄色，继续滴加亚硫酸溶液，直至滴下一滴能够使液体明显（刚）褪色。生成的甲醛用乙酰丙酮比色法测定。在过量铵盐存在下，甲醛与乙酰丙酮生成黄色的二乙酰基二氢卢易司啶， 根据颜色的深浅， 比色定量，生成的颜色能稳定10h。 （二）实验仪器 可见分光光度计 旋涡混合器 （三）试剂及溶液的配制 1.乙酰丙酮试剂：醋酸铵25g，冰醋酸3mL，新蒸馏的乙酰丙酮0.2mL，全部溶解于100mL水中。 2. 0.02mol/L高碘酸溶液 3. 1g/L亚硫酸氢钠溶液 4. 5mmol/L的葡萄糖酸标准溶液。 （四）操作步骤 1. 标准曲线的绘制 准确配制5mmol/L的葡萄糖酸钠标准溶液，按下表在各管中加样。 试管号 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 标准样/mL 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1 高碘酸/mL 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 标准曲线的绘制表 1. 标准曲线的绘制 在室温下任其反应20min 。在旋涡混合器上充分混合并滴加NaHSO3至褐色刚褪。每管各加2mL乙酰丙酮试剂，定容至25mL。沸水浴中加热3min，冷却。在可见分光光度计420nm波长下测定OD 值， 用空白管溶液调零点，以葡萄糖酸浓度为横坐标， Ο D 值为纵坐标绘制标准曲线。 2. 样品中葡萄糖酸含量的测定 精确称取样品0.1~0.2g，加水溶解并定容至100mL。将样品溶液稀释适当倍数，吸取1.0mL样品稀释液加入试管中，再按绘制标准曲线的方法操作，以下各步相同，测得的OD 值在标准曲线上查得相应的葡萄糖酸含量。 （五） 结果记录与计算 （1）结果记录 将实验结果记入下表： 试管号 1 2 3 平均值 样品质量，g 样品溶液的稀释倍数 从标准曲线上查得的葡萄糖酸的含量，μg 样品中葡萄糖酸的含量,% (五）结果记录与计算 （2）计算公式： 式中： w—样品中葡萄糖酸的含量，% m1—从标准曲线上查得的葡萄糖酸的含量，μg F—样品溶液的稀释倍数； m—样品质量，g 100—配制的样品溶液的体积，mL 10-6—将μg换算成g的系数。