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(1)原理:
(2)材料;(3)分离过程 ;(一)凝胶色谱法;㈠ 凝胶色谱法(分配色谱法):;由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成。
如H2CO3/NaHCO3,醋酸/醋酸钠,NaH2PO4/Na2HPO4等;1 、什么是电泳?;2.凝胶电泳法:;影响蛋白质分子运动速度的因素;在一定pH下,使蛋白质基团带上正电或负电;
加入带负电荷多的SDS,形成“蛋白质-SDS复合物”,使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。 ;二、实验操作;(一)样品处理;样品处理;血液组成成分;1.洗 涤 红 细 胞;初次离心后的结果;3次洗涤后的结果;2.释放血红蛋白;(2)血红蛋白的释放:;3.分离血红蛋白;(3)分离血红蛋白溶液:;甲苯层(无色透明);课题3 血红蛋白的提取与分离;利用透析袋透析;课题3 血红蛋白的提取与分离;(二)凝胶色谱操作;材料:交联葡聚糖凝胶G-75;20mmol/L磷酸缓冲液
装填:;(2)凝胶色谱柱的装填; ④洗涤平衡:装填完毕后,立即用缓冲液洗脱瓶,在50cm高的操作压下,用300ml的20mmol/l的磷酸缓冲液(pH为7.0)充分洗涤平衡12小时。注意:1、洗脱液面不要低于凝胶表面,否则可能有气泡混入,影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。2、不能发生洗脱液流干,露出凝胶颗粒的现象。
;3.样品加入与洗脱;3.样品的加入和洗脱;3.样品加入与洗脱;收集得到的纯化后的血红蛋白;课题3 血红蛋白的提取与分离
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