生物化学课件003氨基酸与蛋白质.ppt

在二级结构及超二级结构的基础上，多肽链进一步卷曲折叠，组装成几个相对独立的、近似球形的三维实体。; 结构域是球状蛋白的折叠单位 较小的蛋白质分子或亚基往往是单结构域的。 结构域一般有１００－２００氨基酸残基。 结构域之间常常有一段柔性的肽段相连，形成所谓的铰链区，使结构域之间可以发生相对移动。 结构域承担一定的生物学功能，几个结构域协同作用，可体现出蛋白质的总体功能。 例：脱氢酶类的多肽主链有两个结构域，一个为NAD+结合结构域，一个是起催化作用的结构域，两者组合成脱氢酶的脱氢功能区。 结构域间的裂缝，常是酶的活性部位，也是反应物的出入口;; ;;二、三级结构;? 大的球形蛋白(200氨基酸以上)，常常含有几个结构域。;主要的是二硫键，二硫键不指导多肽链的折叠，三级结构形成后，二硫键可稳定此构象。;;;5、表面常常有空穴，配体结合部位（活性中心）;第七节 亚基缔合与四级结构?; ☆ 有些对称的寡聚蛋白是由两个或多个不对称的等同结构成分组成，这种等同的结构成分称为原体。 如血红蛋白α2β2就是由两个原体αβ组成。 有时也把原体称为单体。; ;亚基间相互作用的表面是不同的，形成线形或螺旋形的高聚物，如微管，病毒外壳。;1、降低比表面积，增加蛋白质的稳定性 2、丰富蛋白质的结构，以行使更复杂的功能。 3、提高基因编码的效率和经济性。 4、使酶的催化基团汇集，提高催化效率。 5、形成一定的几何形状，如细菌鞭毛。 6、适当降低溶液渗透压。 7、具协同效应和别构效应，实现对酶活性的调节;别构蛋白的别构部位与效应物的结合改变了蛋白质的构象，从而对活性部位产生的影响。;就是别构效应，别构部位与效应物的结合对活性部位的影响;正协同效性;第七节 蛋白质结构与功能的关系;8段直的α-螺旋组成，分别命名为A、B、C…H， 拐弯处是由1~8个氨基酸组成的松散肽段（无规卷曲）。 4个Pro残基各自处在一个拐弯处，另外4个是Ser、Thr、Asn、Ile。 ?血红素辅基 ，扁平状，结合在肌红蛋白表面的一个洞穴内。;;His93;p255;2、肌红蛋白的氧合曲线; ;▲接近于???体，4个亚基分别在四面体的四个角上，每个亚基上有一个血红素辅基。 ▲α、β链的三级结构与肌红蛋白的很相似。;;;;;2、 血红蛋白的氧合曲线;肌红蛋白和血红蛋白的氧合曲线的比较;增加CO2的浓度、降低pH能显著提高血红蛋白亚基间的协同效应，降低血红蛋白对O2的亲和力，促进O2的释放，反之，高浓度的O2也能促使血红蛋白释放H+ 和CO2 。;BPG是血红蛋白的负效应物。 BPG（2,3-二磷酸甘油酸）通过与它的两个β亚基形成盐键稳定了血红蛋白的脱氧态的构象，因而降低脱氧血红蛋白的氧亲和力。 ? BPG进一步提高了血红蛋白的输氧效率。在肺部，PO2超过100torr，因此，即使没有BPG，血红蛋白也能被饱和，在组织中，PO2低，BPG降低血红蛋白的氧亲和力，加大血红蛋白的卸氧量。 （1）高山适应和肺气肿的生理补偿变化；BPG升高。 （2）血库储血时加入肌苷可BPG。;★协同效应、波耳效应、别构效应使血红蛋白的输氧能力达到最高效率;三、? 免疫球蛋白的结构与功能;抗原性由抗原分子表面特殊的化学基团决定（一级结构或空间结构），这种决定或控制抗原性的化学基团。;抗体;;;;★抗原抗体反应的条件： ①抗原决定簇与抗体结合部位构象互补。 ②二者各有对应的化学基团，通过作用力使二者结合（离子键、氢键 等）;; ;;;第八节蛋白质的分离、纯化和表征;;★化学组成法测定最低分子量 ★SDS法 ★凝胶过滤法 ★渗透压法 ★扩散系数法 ★沉降系数法和沉降平衡法;1、根据分子组成测定最小分子量; 2、 葡聚糖凝胶过滤法分析蛋白质分子量;3 .根据渗透压测蛋白质的分子量;4.用 SDS—PAGE 测定蛋白质的分子量;③质点大小在1-100nm，可以进行布朗运动;2、选择性沉淀蛋白质的方法;生物碱试剂和某些酸类沉淀法; 指因理、化因素影响，使蛋白质生物的活性丧失。;? 强酸和强碱； ? 有机溶剂：破坏疏水作用； ? 去污剂：去污剂都是两亲分子，破坏疏水作用； ? 还原性试剂：尿素、?-硫基乙醇； ? 盐浓度：盐析、盐溶； ? 重金属离子：Hg2+、pb2+，能与-SH或带电基团反应。 ? 温度； ? 机械力：如搅拌和研磨中的气泡。;★制备活性蛋白质时严防蛋白质变性★ ;前处理 粗分级 细分级 浓缩 保存;电 泳;1、前处理;②差速离心法收集细胞的某一组分;①（NH4）2SO4分级沉淀法（盐析） ②等电点选择性沉淀法 ③有机溶剂分级沉淀法 ④热处理选择性沉淀法 ⑤生物碱或三氯乙酸选择性沉淀法; ;;;★根据蛋白质的溶解度分