酶联免疫吸附试验双抗体夹心法.pptxVIP

医学免疫学实验;实验三;（一）1、酶联免疫吸附试验（ELISA）; ;;6;tubercle bacillus with fluorescence;8;酶免疫技术; 1）已知抗体包被 2）洗板 3）加待检抗原标本 4）洗板 5）加酶标记抗体 6）洗板 7）加底物显色，测定 (measure color) ;（一）免疫标记技术 1、酶联免疫吸附试验 (ELISA) ------双抗体夹心法;（一）1、酶联免疫吸附试验（ELISA）;13;;（一）2、斑点免疫层析试验(dot gold immunochromatographic assay，DICA);16; ;18;（一）2、斑点免疫层析试验; ;（二）1. 外周血单个核细胞的分离 密度梯度离心法; 离心前 离心后 ;Main method:;[方法];[方法];Lymphocytes (淋巴细胞);Lymphocytes, cancer cells? 淋巴细胞（淋巴癌？）; normal small lymphocyte in blood smear (血片中淋巴细胞); small lymphocytes (cancer cells) in non-Hodgkin’s lymphoma 小淋巴细胞（非霍奇金小淋巴细胞淋巴瘤）; （三）免疫细胞功能测定 1、E花环试验 原理： T细胞表面有绵羊红细胞受体（E受体）(CD2)，若T细胞与绵羊红细胞共同孵育，T细胞周围吸附绵羊红细胞，为花环形成细胞， 可用来鉴定和计数T细胞 ;; ; ;rosette forming cell;rosette forming cell;rosette forming cells;rosette forming cell (electron microscope); ;（三）2、淋巴细胞转化试验; ; ;核分裂相细胞;转化的淋巴细胞包括以下三种细胞： （1）淋巴母细胞：体积明显增大，为成熟淋巴细胞的3～4倍。核膜清晰，核染色质疏松，呈细网状。核内见明显核仁1～4。胞浆丰富，嗜碱性，有伪足样突出。胞浆内有时可见小空泡。 （2）过渡型淋巴细胞：具有上述淋巴母细胞的某些特征。核质疏松，可见核仁，胞浆增多，嗜碱性强。体积比小淋巴细胞大。 （3）核分裂相细胞：核呈有丝分裂，可见 许多对成堆或散在的染色体。; ;46;① untransformed lymphocyte, small ② transitional cell ③ typical lymphoblast ; untransformed lymphocyte;Acute lymphocytic leukemia;Lymphoblast, 原始淋巴细胞;Lymphoblast, 原始淋巴细胞;核仁;图2（大图）、狗急性淋巴细胞性白血病血片，可见大量淋巴母细胞。 图3（小图）、外周血涂片，成熟小淋巴细胞;; ;（四）结核病相关的免疫试验(免疫学检测技术在疾病诊断中的应用举例); ; ;结核菌：; ; ; 阳性的意义：阳性表示曾感染结核,不一定现在患病.　　1.一般阳性和中度阳性：①结核病现症患者.②已受结核菌感染但并不意味着发病或患病.③卡介苗接种所致变态反应.④3岁内未接种卡介苗者提示体内存在结核病灶, 应及时进行结核菌检查,影像学检查,血沉等检查以确定诊断和治疗.　　2.强阳性：（1）结核病患者.（2）感染结核菌未发病者.强阳性人群结核病的发病率高,在未找到病变时可作预防性治疗.　　3.如果2年内PPD试验结果由阴性（-）转为阳性（+）,或反应强度从原来硬结直径10mm增至10mm,提示新近感染过结核菌,或可能存在活动性病灶. 4.如用高稀释度（1IU）作皮试呈强阳性者，常提示体内有活动性结核灶。 ;阴性的意义：①表示未受结核菌感染.（未受感染或曾受感染但时间已久，反应消失者）②婴幼儿PPD试验阴性应该及时接种卡介苗. ③免疫力低下（如免疫缺陷病）④某些情况下不排除已受结核菌感染,如变态反应前期;患急性传染病,发热,使用免疫抑制剂等;免疫功能低下如重症结核病,慢性消耗性疾病,肿瘤,艾滋病,高龄等.阴性也不表示没有结核感染.值得注意的是假阴性情况,在临床上有感染结核的确切依据而患者PPD试验却阴性,这种情况常见于以下疾病：初次感染结核菌4