2020_2021学年新教材高中生物第1章发酵工程2.2微生物的选择培养和计数学案新人教版选择性必修3.doc

PAGE 16 - 微生物的选择培养和计数 必备知识·素养奠基 一、选择培养基 1.实验室中微生物筛选的原理:人为提供有利于目的菌生长的条件(包括营养、温度、pH等),同时抑制或阻止其他微生物的生长。 2.选择培养基概念:在微生物学中,允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 3.选择培养基配方的设计: (1)原理:分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解产生NH3。 (2)培养基配方设计:以尿素为唯一氮源的选择培养基。 如果要从土壤中分离出固氮微生物,那么对培养基有什么要求呢? 提示:固氮微生物能利用空气中的N2,因此培养基中不应添加氮源,这样就只有固氮微生物才能生存。 二、微生物的选择培养 1.方法:对样品进行充分稀释,然后将菌液涂布到制备好的选择培养基上。 2.稀释涂布平板法的操作过程: (1)系列梯度稀释操作: (2)涂布平板操作。 ①取菌液:取0.1__mL菌液,添加到培养基表面。? ②涂布器灭菌:取出浸在酒精中的涂布器,放在火焰上燃烧,酒精燃尽后,冷却涂布器。 ③涂布过程:用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面,涂布时可转动培养皿,使菌液分布均匀。 3.培养:待涂布的菌液被培养基吸收后,将平板倒置,放入恒温培养箱中培养,观察。 在进行稀释操作时,需要在酒精灯火焰附近操作吗?解释原因。 提示:需要。在进行稀释操作时,如果不在酒精灯火焰附近进行,就有可能造成杂菌污染。 三、微生物的数量测定 1.稀释涂布平板法: (1)统计依据。 当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。 (2)操作。 ①一般选择菌落数为30～300的平板进行计数。 ②选用一定稀释范围的样品液进行培养,在同一稀释度下,应至少对3个平板进行重复计数,然后求平均值。 2.显微镜直接计数:利用特定的细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下观察、计数,然后再计算一定体积的样品中微生物的数量。 四、探究·实践——土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1.提出问题:如何分离土壤中分解尿素的细菌?每克土壤样品中含有多少分解尿素的细菌? 2.基础知识: 组分 含量 提供的主要营养 KH2PO4 1.4 无机盐 Na2HPO4 2.1 MgSO4·7H2O 0.2 葡萄糖 10.0 碳源 尿素 1.0 氮源 琼脂 15.0 凝固剂 H2O 定容至 1 000 mL 水 3.实验设计: (1)土壤取样:先铲去表层土,取距地表3～8 cm的土壤层,将样品装入 (2)样品稀释:一般选用1×__104、1×__105、1×__106倍的稀释液进行平板培养。? (3)微生物的培养与观察:一般在30～37__℃的温度下培养1～2天,每隔24__h统计一次菌落数目,选取菌落数目稳定时的记录作为结果。? 4.操作提示: 选出下列关于实验操作的正确说法①②⑤。 ①本实验耗时长,应提前制订好计划,提高效率。 ②本实验用到的器材比较多,应该对试管和平板做好标记。 ③取土样的铁铲和取样纸袋使用前都要经过消毒。 ④为了防止杂菌污染,从酒精中取出的涂布器应该直接在酒精灯火焰上充分燃烧灭菌。 ⑤过热的涂布器不能直接放在盛有酒精的烧杯中。 5.结果分析与评价: 结合实验过程,判断下列实验分析的正误: (1)由于使用了选择培养基,因此本实验不需要设置对照 组。 (×) 提示:应该设置未接种的平板和接种在牛肉膏蛋白胨培养基的平板作为对照。 (2)在同一稀释度下,至少要涂布3个平板。 (√) (3)当菌落数目稳定时,选取菌落数在 30～300 的平板进行计数。 (√) (4)应该仔细观察培养基上菌落的形状、大小、颜色等特征,并要做好记录。 (√) (5)统计的分解尿素的细菌菌落数目就是样品中分解尿素的活菌数目。 (×) 提示:统计的菌落数目还要经过计算才能代表样品中的活菌数目,而且数目偏低,因为当两个或多个细菌连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落。 选择培养基上生长分解尿素的细菌之后,pH会发生变化吗?解释原因。 提示:会升高。分解尿素的细菌可以将尿素分解成NH3,导致培养基的pH升高。 关键能力·素养形成 知识点一　微生物的选择培养与计数方法 1.选择培养的目的:从众多微生物中分离出需要的特定微生物。 2.筛选微生物常用培养基——选择培养基和鉴别培养基: 选择培养基 鉴别培养基 特殊 成分 控制某一条件(如唯一氮源)或加入某种物质(如青霉素) 加入某种指示剂或化学药品 目的 抑制其他微生物生长,促进目的微生物的生长 与微生物的代谢产物或培养基中的成分发生特定反应 用途 培养、分离出特定微生物 鉴别不同的微生物 举例 培养酵母菌