医疗机构临床基因扩增检验工作导则.docVIP

?资?料? ?资?料? ?资?料? ?资?料? 附件 医疗机构临床基因扩增检验 实验室工作导则 一、临床基因扩增检验实验室的设计 （一）临床基因扩増检验实验室区域设计原则。原则上 临床基因扩增检验实验室应当设置以下区域：试剂储存和准 备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。这4个区域 在物理空间上必须是完全相互独立的，各区域无论是在空间 上还是在使用中,应当始终处于完全的分隔状态，不能有空 气的直接相通。根据使用仪器的功能，区域可适当合并。例 如使用实时荧光PCR仪，扩增区、扩增产物分析区可合并； 采用样本处理、核酸提取及扩增检测为一体的自动化分析 仪，则标本制备区、扩增区、扩增产物分析区可合并。各区 的功能是： 1 ?试剂储存和准备区：贮存试剂的制备、试剂的分装和 扩增反应混合液的准备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存 和准备。 2?标本制备区：核酸（RNA、DNA ）提取、贮存及其加 入至扩增反应管。对于涉及临床样本的操作,应符合生物安 全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。 3?扩增区：CDNA合成、DNA扩增及检测。 4 ?扩增产物分析区：扩增片段的进一步分析测定，如杂 交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。 临床基因扩増检验实验室的空气流向。临床基因 扩增检验实验室的空气流向可按照试剂储存和准备区一标 本制备区—扩增区—扩增产物分析区进行，防止扩增产物顺 空气气流进入扩增前的区域。可按照从试剂储存和准备区一 标本制备区-扩增区-扩增产物分析区方向空气压力递减 的方式进行。可通过安装排风扇、负压排风装置或其他可行 的方式实现。 工作区域仪器设备配置标准。 1 ?试剂储存和准备区。 (1 )2~8°C和?20°C以下冰箱。 (2 )混匀器。 (3 )微量加样器(覆盖0?2?1000川)。 (4 )可移动紫外灯(近工作台面)。 (5)消耗品：一次性手套、耐高压处理的离心管和加 样器吸头。 (6 )专用工作服和工作鞋(套)。 (7 )专用办公用品。 2标本制备区。 (1 ) 2?8°C冰箱、?20°C或-80°C冰箱。 (2 )高速离心机。 . .资.料. . .资.料. (3 )混匀器。 (4 )水浴箱或加热模块。 (5 )微量加样器(覆盖0.2-1000pl )。 (6 )可移动紫外灯(近工作台面)。 (7 )生物安全柜。 (8)消耗品：一次性手套、耐高压处理的离心管和加 样器吸头(带滤芯)。 (9 )专用工作服和工作鞋(套)。 (10)专用办公用品。 (11 )如需处理大分子DNA ,应当具有超声波水浴仪。 3 ?扩增区。 (1 )核酸扩增仪。 (2)微量加样器(覆盖0.2-1000|jl),(视情况走)。 (3 )可移动紫外灯(近工作台面)。 (4)消耗品：一次性手套、耐高压处理的离心管和加 样器吸头(带滤芯)。 (5 )专用工作服和工作鞋。 (6 )专用办公用品。 4 ?扩增产物分析区。 视检验方法不同而走，基本酉己置如下： (1 )微量加样器(覆盖0.2-1000^1 )。 (2 )可移动紫外灯(近工作台面)o （3 ）消耗品：一次性手套、加样器吸头（带滤芯）。 （4 ）专用工作服和工作鞋。 （5 ）专用办公用品。 上述各区域仪器设备配备为基本配备，实验室应当根据 自己使用的扩增检测技术或试剂的特点，对仪器设备进行必 要的增减。 二、临床基因扩增检验实验室工作基本原则 （一）进入各工作区域应当严格按照单一方向进行，即试 剂储存和准备区-标本制备区-扩增区一扩增产物分析 区。 （二）各工作区域必须有明确的标记，不同工作区域内的 设备、物品不得混用。 （三）不同的工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜 色）。工作人员离开各工作区域时”不得将工作服带出。 U!）实验室的清洁应当按试剂贮存和准备区- U! ）实验室的清洁应当按试剂贮存和准备区-标本制备 区-扩增区-扩增产物分析区的方向进行。不同的实验区域 应当有其各自的清洁用具以防止交叉污染。 （五）工作结束后,必须立即对工作区进行清洁。工作区 的实验台表面应当可耐受诸如次氯酸钠的化学物质的消毒 清洁作用。实验台表面的紫外照射应当方便有效。由于紫外 照射的距离和能量对去污染的效果非常关键，因此可使用可 移动紫外灯（254nm波长），在工作完成后调至实验台上 ? ?资?料? ?资?料? ?资?料? 60 ~ 90cm内照射。由于扩增产物仅几百或几十碱基对（bp ）, 对紫外线损伤不敏感,因此紫外照射扩增片段必须延长照射 时间,最好是照射过夜。 （六）实验室的安全工作制度或安全标准操作程序,所有 操作符合《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2008 ）。 三、临床基因扩增检验实验室各区域工作注意事项 （一） 试剂储存和准备区。贮存试剂和用于标本制备的