120例耐多药肺结核中医证候与基因突变的研究.docx

120例耐多药肺结核中医证候与基因突变的研究 2021年我国被世卫组织列为全球25个耐多药结核病和严重耐多药结核病最优先控制的国家之一，且位居第一位。耐多药结核病（multidrug-resistant tuberculosis，MDR-TB）和广泛耐药结核病（extensively drug-resistant tuberculosis，XDR-TB）已成为世界范围最为严重的流行疾病，其治疗费用多，治愈率低，死亡率高，是结核病控制所面临的最大难题。证候是中医临床诊断和治疗的逻辑起点，是辨证论治的核心，加强揭示规律和本质的中医证候学研究具有重要的意义。本研究选取120例耐多药肺结核病例，应用现代分子基因芯片检测技术分析利福平、异烟肼耐药基因突变位点与中医证候的关系，初步明确耐多药肺结核中医证候客观化指征，为提高辨证论治水平奠定基础。 1 资料与方法 1.1 一般资料 选择2021年1月至2021年12月住院及门诊耐多药结核病患者120例，其中男97例，女23例。年龄18～65岁，平均年龄（45.64±15.55）岁，病程3～600个月，平均病程（56.24±31.52）月。所有患者均符合《耐药结核病防治手册》关于耐多药肺结核的诊断，以及国家中医药管理局颁布的《中医证候诊断标准》、《中药新药临床研究指导原则》等关于“肺痨（肺结核）”的诊断标准。排除标准：①罹患各系统重大疾病、长期服用免疫调节剂等可能干预中医证候判断的患者；②妊娠期或哺乳期妇女、精神病患者；③合并肺外结核病者。 1.2 中医证候诊断标准 ①肺阴亏虚证。主症：干咳，盗汗，手足心热；次症：痰中带血丝或血点，咳声短促，胸部隐隐作痛，口燥咽干，颧红，皮肤干灼；舌红少津，脉细或细数。②阴虚火旺证。主症：呛咳气急、午后潮热、盗汗；次症：时时咯血色鲜红，形体消瘦，五心烦热，骨蒸，失眠，颧红，口渴，胸胁掣痛，痰少质粘或痰黄稠量多，口燥咽干；舌红干，苔薄黄或见花剥苔，脉细数。③气阴两虚证。主症：气短声低、午后潮热、自汗与盗汗并见；次症：咳痰清稀、咳嗽无力，痰中夹血血色淡红，神疲乏力，畏风怕冷，纳呆，颧红，面色晄白；舌光淡，边有齿印，脉细弱而数。④阴阳两虚证。主症：形寒肢冷，自汗，盗汗；次症：潮热，五更泄泻，面浮肢肿，咳逆喘促少气，咯痰色白，痰中带血丝色暗淡，男子遗精，女子经少或经闭；舌质光淡甚者隐紫，少津，脉细数或虚大无力。以上以主症必备其中两项，次症兼具两项以上，综合舌、脉象即可诊断，均由三位副主任中医师以上职称专家共同进行判断。120例耐多药肺结核患者中肺阴亏虚证者11例，其中男9例，女2例，年龄20～64岁，平均年龄（44.09±16.18）岁，病程6～580个月，平均病程（57.18±30.96）月；阴虚火旺证者49例，其中男39例，女10例，年龄18～64岁，平均年龄（46.33±14.65）岁，病程3～590个月，平均病程（56.07±29.45）月；气阴两虚证者46例，其中男38例，女8例，年龄18～65岁，平均年龄（45.87±16.21）岁，病程5～600个月，平均病程（57.58±31.22）月；阴阳两虚证者14例，其中男11例，女3例，年龄19～65岁，平均年龄（46.23±15.34）岁，病程3～590个月，平均病程（57.41±32.15）月。各组患者男女比例，平均年龄以及平均病程等一般资料比较，差异均不具有统计学意义，组间具有可比性（P0.05）。 1.3 基因芯片方法 选用Evidenceinvestigator-生物芯片仪（英国朗道实验诊断有限公司生产）。核酸提取：取 2ml痰标本于标本消化管内，加入NaOH-NALC 2ml。室温静置15min。提取1ml的标本处理液离心5min（*****r/min）共2次。向离心管内加入80μl核酸提取液，涡旋振荡混匀后移入核酸提取管。将核酸提取管于超声振荡器中震荡15min。待水浴锅温度达到 95℃以上后，将核酸提取管放入其中处理5min。取出后离心1min（*****r/min）。扩增：将PCR扩增试剂1、2、3分装扩增管中，18μl/管，每个管中加入2μl 模板DNA、阳性质控品或阴性质控品，做好标记。将扩增管放入扩增仪以下表的程序扩增。杂交：根据样品数目（n） 取2n个PCR管置于PCR架上，排成两排，同一列编排为一组，分别向PCR管内加入9μl杂交缓冲液；取出PCR产物，分别向列排管中加入反应体系一3μl，在上侧管内加入3μl对应体系二充分吸打混匀，在下侧管内加入3μl对应体系三充分吸打混匀，各反应体系共计15μl。将杂交混合物置于PCR仪上95℃加热5min，待其变性后立即放入冰水混合物中冰浴3min。吸取13.5μl杂交混合物加入杂交反应盒芯片点阵中，密封杂