实验一-实验室环境和人体表面微生物检查.pdf

实验 2 实验室环境和人体表面的微生物检查 13 生物基地 刘洋 201300140059 一、 实验目的 1. 证实实验室环境与人体表面存在微生物 2. 体会无菌操作的重要性 3. 观察不同类群微生物的菌落形态特征 4. 掌握生理生化反应培养基的配置原理和一般方法步骤 5. 巩固无菌操作技术 二、 实验器材 1. 肉膏蛋白胨琼脂平板 牛肉膏 1.05g、蛋白胨 3.5g、NaCl 1.75g、琼脂 7g、水 350ml 、pH 7.0~7.2 、 121 ℃灭菌 20min 。 2. 溶液和试剂 无菌水 3. 仪器和其他用品 灭菌棉签（装在试管内） 、试管架、煤气灯或酒精灯、记号笔和废物缸等。 三、 实验原理 通过培养的方法使肉眼看不见的单个菌体在固体培养基上，经过生长繁殖形成几百万个菌聚集在 一起的肉眼可见的菌落。 四、 实验内容及步骤 1. 在标签纸上做好标记并贴在培养皿侧面。 2. 牛肉膏蛋白胨培养基的制备： （1） 称量：准确称取牛肉膏 1.05g、蛋白胨 3.5g、NaCl 1.75g 放入烧杯中。 （2 ） 熔化：在上述烧杯中加入少于所需的水量（所需水量为 350ml ），用玻璃棒搅匀，补充水到所 需的总体积 350ml 。 （3） 调 pH ：用 1mol/L NaOH 和 1mol/L HCl 进行调节，直至溶液 pH 达到 7.0~7.2 。 （4 ） 分装：将其中 200ml 溶液装入 500ml 三角瓶中，向三角瓶中加入 4.0 克琼脂，向烧杯剩余液体 中加入 3.0 克琼脂，在石棉网上加热烧杯，使琼脂溶解，将烧杯中溶液分装到 10 支试管中，每 支试管中加入体积为试管总体积的 1/5 左右。 （5） 加塞：在三角瓶口上塞上棉塞，防止外界微生物进入造成污染。 （6） 包扎：加塞后，在棉塞外包一层牛皮纸， 将全部试管用麻绳捆好 （还有一支装有无菌水的试管） ， 同样的方法把三角瓶包好，扎好。用记号笔注明培养及名称、组别、配制日期。 （7） 灭菌：将上述培养基以 0.1MPa ，121℃， 90min 高压蒸汽灭菌。 （8） 搁置斜面：将灭菌的试管培养基冷却至 50℃左右，将 试管口端搁在玻璃棒或其他合适高度的 器具上，搁置的斜面长度以不超过试管的总长的一般为宜。 3. 倒平板： 点燃酒精灯，右手握住三角瓶底部，用左手小指将棉塞夹住，拔出，随之将瓶口边缘在火焰上 过一下，杀死粘在瓶口外的杂菌。左手拿起一套平皿，用无名指和小指托住平皿底部，用中指和大 拇指夹住皿盖并开启一缝，恰好能让三角瓶伸入，随后倒出培养基。倒入 15~20ml 培养基，铺满整 个皿底。盖上皿盖，置水平位置待凝。重复上述操作，直至倒够所需数量。 4. 微生物的接种： （1） 在火焰旁，半开皿盖，从试管中取出灭菌湿棉签，在手心上擦拭约 2cm2 的范围，然后将棉签 从平板的开启处伸进平板表面，在培养基上涂抹，闭合皿盖，放回棉签。 （2 ） 在火焰旁，半开皿盖，从试管中取出灭菌湿棉签，在实验台面擦拭约 2cm2 的范围，然后将棉 签从平板的开启处伸进平板表面，在培养基上涂抹，闭合皿盖，放回棉签。 （3） 取六个培养皿，在实验室打开皿盖，三个暴露 5min ，三个暴露 10min ，之后盖好皿盖，并做好 标记。 （4 ） 取棉签在头发上擦拭 2cm2 的范围，然后将棉签从平板的开启处伸进平板表面，在培养基上涂 抹，闭合皿盖，放回棉签。 5. 培养： 将所有的琼脂平板翻转，使皿底朝上，从接触空气的两组共六个培养皿中各取出一个置 27 ℃