(一)四逆汤配伍之佐制实验——急性毒性实验.docx

(一 )四逆汤配伍之佐制实验——急性毒性实验 [课时数 ]4 课时 [目的要求 ]通过拆方及组成方子时的变化现象，明确佐制药物在方子配伍中 发挥作用的机理，并熟悉方子多半致死量 (LD 50)的测定方法， [实验原理 ]多半致死量是指可以引起试验动物一半死亡的剂量，为标志动物 急性中毒程度的重要常数， 四逆汤中附子、 干姜相伍为大辛大热之品， 且附子生 用有毒性，故配入炙甘草，减缓烈性，制药毒性，有佐制之用。 [标本、教具 ]器材：普通天秤 (100g)，1ml 注射器、 6 号针头、豚鼠框。动物： 小白鼠 30-50 只，体重 18-24g，雌雄均可。或大白鼠 30-50 只，体重 180-250g，雌雄均可，方药：①四逆汤：生附子 30g 灸甘草 30g 干姜 27g。②四逆汤去甘草，生附子 30g 干姜 27g，方药制备：干姜提取挥发油，生附子、甘草各水煎 2h、1.5h，归并药液，将药液浓度制备成每毫升含生药 1 克即得。四逆汤去甘草制备方法同上。 [实验方法与技巧 ] 1．探索剂量； 取所选小白鼠称重， 以 3 只为 1 组，分 3-4 纽，各纽剂量按等比极数列给与 (2：1 或 3： 1)，由腹腔或尾静脉分别注射四逆 汤原方药液与四逆汤去甘草方药液，察看组动物于给药后 24h 内动物死亡时间， 死亡率，找出引起 100％死亡 (LD 50 和 50 ) 0％(LD )死亡率剂量所在的范围。然后按 等比级或等差级数插几其中间剂量，按下列公式，求出公比 r(r 在 0.7—1.4 之间 之宜 )。 r=n-1 b （ n 为实验动物组数， b 为 100%死亡剂量， a 为死亡剂量） a 2．进行正式实验： 把预实验中求出的公比 r，—按等比极数计算出各组间的 给药剂量分为 a、ar、ar2 arn-1，相邻剂量之间呈 1：0.8 或 1：0.7，要求最小 剂量组的反响率为 0％，最大剂量的反响率为 100％，按随机分组法将动物分红 几组，每组 5 或 7 只动物。按求出剂量腹腔或尾静脉注射给药后， 察看中毒症状 的表观 (喜悦、惊厥、抑制、昏倒、心跳，呼吸停止等 )记录动物出现中毒的症状 和死亡时间，用改进寇氏法计算药物的 lD60 及其平均可信限。 计算公式 （1）当 Pm=1, pn=0 时 LD 50=lg-l[xm-i(sp-0.5) ] 当 pm≠1 或 pn≠0，用校正公式 1 LD 50=lg-l[xm-i(sp-a5)+ 4 (1-pm-pn)] xm：最大剂量组的剂量对数 i：组距 (相邻对数剂量之差 ) ∑p：各组死亡率之和 pm：最大死亡率 (用小数表示 ) pn：最小死亡率 (用数表示 ) 标准误计算： sx50=I ∑ p-∑p2 n-1 LD 50 的平均可信限 PL=LD 50 +4.52×LD 50×Sx50 实验结果 药物 剂量 动物数 中毒症状 死亡时间 死亡率 [注意事项 ]l ．实验药物配伍剂量应按照原方； 2．煎煮制备药液时，应按要 求进行煎煮，浓缩、离心，滤纸过滤，兑。入干姜提职液定容。 3．制备药液应 于实验当天或前一天进行； 4．给药剂量要求正确； 5．注意温度、环境对实验结 果影响， [思考题 ]1．从两组实验动物的 LD60 剖析两组药物中佐制药物的配伍关系， 2．联系现代药理研究解释二方作用机理： [参照文件 ]山西中医学院方子学实验指导