发育毒性与致畸作用.pptVIP

学习文档 胚胎干细胞（ESC）试验 ESC是一种具有发育全能型的细胞，一般从哺乳动物的囊胚内细胞群分离培养而来。 适当条件下，ESC可被诱导分化为多种组织、细胞。 最早建立的ESC株来源于小鼠，此后的20多年里相继建立了猪、牛、兔、灵长类动物的ESC。 学习文档 胚胎干细胞（ESC）试验 由于ESC提供了在细胞和分子水平上研究胚体发育过程中早期事件的良好材料，在发育毒理学、药物开发领域的前景非常广阔。 Laschinski等研究了几种化学物对ESC的毒性效应，发现ESC对致畸物的敏感性比培养的纤维细胞高。 此外，ESC在发育毒理学的应用，可避免物种差异，至少部分解决了实验动物结果外推于人的难题。 学习文档 发育毒性的替代试验 体内预筛试验（C.K试验） 1982年由Chernoff 和 Kavlock提出改进。 原理：大多数出生前受到的损害将在出生后表现为存活力下降和（或）生长障碍。故在仔鼠出生后，观察其外观畸形、胚胎死亡、生长迟缓等发育毒性表现，而不进行常规试验中内脏和骨骼检查，就可达到初筛目的。 学习文档 发育毒性的替代试验 体内预筛试验（C.K试验） 美国EPA在“可疑发育毒物危险度评价指南”（1985）中指出：在该试验中造成胎仔死亡的毒物应优先考虑进行深入的发育毒性试验，影响胎仔生长的毒物次之，该试验结果阴性而且试验设计合理者，原则上不作进一步的测试。 学习文档 教学要求 【掌握】 发育毒性和致畸作用的基本概念； 掌握发育毒性和致畸作用的特点。 【熟悉】 母体毒性与发育毒性的关系； 发育毒性和致畸作用的常用评价方法。 【了解】 发育毒性的剂量-反应模式； 发育毒性及致畸作用的机制。 胚胎-胎仔发育毒性试验流程图 围产期毒性试验流程图 致畸试验 致畸作用是发育毒性中最重要、最容易观察到一种表现，故化学物发育毒性的评定主要通过致畸试验。 在致畸试验中除可观察到出生幼仔畸形外，也可同 时发现生长发育迟缓和胚胎致死。 Ⅱ段试验是评定化学物是否具有致畸作用的标准方法。 动物选择:一般要求选用两种哺乳动物 啮齿类：首先考虑大鼠，也可采用小鼠。 非啮齿类：多选家兔。 致畸试验 学习文档 剂量分组 试验剂量组最少应设三个剂量组：高、中、低。 每组剂量成等比级数关系。 另设对照组。 原则上高剂量组可引起母体轻度中毒；中剂量组可允许母体出现某些极轻微中毒症状；最低剂量组不应观察到任何中毒症状。 致畸试验 学习文档 动物交配 将性成熟雌雄动物按雌雄1：1或2：1比例同笼交配，每日通过阴栓或阴道涂片精子检查，将已确定受孕雌鼠随机分入各剂量组和对照组。出现阴栓或精子之日即为受孕第1天。 致畸试验 学习文档 动物染毒 染毒时间：在器官形成期，即从着床期到硬腭闭合 大、小鼠孕期的第6~15天 兔孕期的6~18天。 染毒方式与途径应与人体实际接触情况一致 一般多经口给予。 致畸试验 学习文档 染毒期间观察妊娠动物的： 体征和死亡（1次/日）; 体重和体重改变（ 2次/日）； 摄食量（ 1次/日）； 其他毒性研究中已证实的重要靶效应。 致畸试验 学习文档 胎体检查： 自然分娩前1~2天将受孕动物处死： 一般大鼠在受孕后第19~20天； 小鼠第18~19天； 家兔在第29天。 致畸试验 学习文档 剖腹处死时对所有妊娠动物进行尸体解剖和肉眼检查。 保存肉眼发现有改变的脏器，以便进行组织学评价。 取出子宫及活产胎体，并另行记录死胎和吸收胎。 活胎取出后，先检查性别，逐只称重，并按窝计算平均体重，然后由下列几方面进行畸形检查： 外观畸形 内脏及软组织畸形 骨骼畸形。 畸形检查只限活产胎体。 致畸试验 学习文档 以上检查只能检出结构与形态的畸形，不能检出可能发生的生化功能或神经行为缺陷。 故为了全面了解可能存在的先天缺陷和生理功能异常，可将试验雌鼠保留1/4左右待其自然分娩，饲养观察出生幼仔以便检查。 致畸试验 学习文档 结果评定： 对母体毒性的评价指标：体重、体重变化、 食物和水消耗量、死亡率、交配率、受孕 率、脏器重及母体畸胎出现率等。 致畸试验 学习文档 结果评定： 对孕体影响的评价指标：着床数、黄体数、 平均胎体体重/窝、活胎数/窝、吸收胎数/ 窝、畸胎数/窝等。 致畸试验 学习文档 结果评价 发育毒性的剂量-反应关系比较复杂。随着剂量增加，先出现发育迟缓，然后胚胎-胎儿死亡和畸形发生，剂量很大时可致全部死亡。 试验最后应能得出受试物对母体和胚胎-胎儿各自的NOAEL和LOAEL。 为了比较不同化学物的致畸强度，可计算致畸指数： 致畸试验 学习文档 致畸指数 = 评定标准： 致畸指数在10以下不致畸； 10-100为致畸； 100以上为强致畸。 学习文档 动物实验结果外推到人的问题 动