土壤酶活性及微生物测定.pdf

土壤酶活性及微生物测定 土壤酶活性测定 取样工具及取样方法 在选好适当地点后， 用小铲子除去表土， 取离地面 5-15cm 处的土约 10g，盛入清洁 的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。 土样在自然条件下烘干装入袋中备用。 所需试剂： 酒石酸钠、 NaCl 、阿拉伯胶、纳氏试剂、硫酸铵 [(NH ) SO ] 、甲苯、苯磷酸二钠、 4 2 4 NaAc.3H O、HAc 、酚、铁氰化钾、 4-氨基安替吡啉、碘化钾、氯化汞、氢氧化钾、 、 2 配置方法： 铵态氮标准溶液 ：称取 0.4717g(精确至 0.0001g)干燥的硫酸铵 [(NH 4)2SO4] 溶于水中，再 加水稀释至 1000mL ，此溶液 1mL 含 100μg N 。往 500ml 容量瓶中注入 10、25、40 、60、 75、 90ml 标准溶液并用蒸馏水稀释至刻度，制备成的溶液在 490nm 下比色，并绘制标 准曲线。 醋酸缓冲液 ：PH5.0，NaAc.3H2O50g，溶于适量水中， 加 6mol/LHAc34ml ，稀释至 500ml 。 硼酸缓冲液 ：PH9.0，80 毫升 0.05mol/l 硼砂 （Na B O .10H O ）和 0.2mol/l 的硼酸混合。 2 4 7 2 纳氏试剂 ：将碘化钾 10g 溶于 10ml 水中，边搅拌边慢慢地加入氯化汞饱和水溶液，直 至生成的红色沉淀不再溶解为止。加入氢氧化钾 30g 并溶解之，再加入氯化汞饱和溶液 1ml，加水至 200ml 。静置，取上层清液，贮于棕色瓶中 酚的标准溶液 ：（1）原液— 1 克酚溶于蒸馏水中定容至 1 升，溶液在暗色中稳定， （2 ） 工作液—取 50ml 原液稀释至 1 升（ 1ml 含 0.05mg 酚）；分别向 100ml 容量瓶中注入 1、 2、3 、4、 5、 6、7ml 工作液并显色定容（分别相当于 0.05、0.10 、0.15、0.20、0.25、 0.30、0.35 毫克酚），待颜色稳定后， 570nm 比色绘制标准曲线。 测定方法 磷酸酶活性测定 一、 试验原理 土壤中的磷， 很大部分以有机磷化合物的形式存在。磷酸酶能促进有机磷化合物的 水解。实验表明，土壤微生物对于土壤含磷有机物质的矿化起着主要作用；土壤的磷酸 酶活性，在很大程度上取决于土壤的腐殖质含量，活性磷量，能矿化有机磷化合物的微 1 生物数量，植物类型等因素，土壤的磷酸酶活性可以表征土壤的肥力状况。 二、 实验仪器 恒温箱、分光光度计、 三、 实验药品 甲苯、苯磷酸二钠、酚、醋酸缓冲液、硼酸缓冲液、铁氰化钾、 4-氨基安替吡啉、 四、 实验步骤 取 5 克过 20 目筛的风干土样于 50 毫升容量瓶中，用 0.8(16 滴 )毫升甲苯处理， 15 分钟后，加入 5 毫升苯磷酸二钠溶液（ 6.75 克苯磷酸二钠溶于水，并稀释至 1 升）和 5 毫升相应的缓冲液（碱性磷酸酶用 pH10 的硼酸缓冲液，中性磷酸酶用 pH7.0 的柠檬酸 缓冲液，酸性磷酸酶用 pH5.0 的醋酸缓冲液） 。仔细混合后，将反应物置于 37 摄氏度恒 温箱中培养 12 小时，然后用蒸馏水定容至刻度，摇匀过滤，用 5 毫