产气荚膜梭状芽孢杆菌检验.pptVIP

A.2 液体硫乙醇酸盐培养基（FTG） －－大量培养该菌用 胰蛋白胨15.0 g L-胱氨酸0.5g 酵母粉5.0 g 葡萄糖5.0 g 氯化钠2.5g 硫乙醇酸钠0.5g 刃天青0.001g 琼脂0.75g 蒸馏水1 000.0 mL pH 7.1±0.2 有效降低氧化还原电位，防止过氧化物的积累对菌体产生的毒害；同时硫氢基团有钝化含砷、汞及其它含重金属防腐剂的抑菌作用 少量琼脂可以防止二氧化碳、氧气和还原产物的扩散， 氧化还原指示剂，氧化态粉红色，还原态无色 注意：临用时粉红色超过1/3时，水浴加热至无色再用，如全管呈粉红色时，不宜再用。 学习文档 /peiyangji/show_351.html 食品伙伴网－食品数据库－培养基 学习文档 学习文档 学习文档 4、培养基和试剂 没改好！！！ 4.1 庖肉培养基 －－产生大量气体，肉渣或肉块略带粉红，但不消化 4.2 亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂（SPS） -- 能将亚硫酸盐还原为硫化物，在含亚硫酸盐及 铁盐(含有柠檬酸铁胺)的琼脂中形成黑色菌落，SPS 分离培养和计数用 （SPS） 学习文档 4.3 液体硫乙醇酸盐培养基（FT） －－大量培养该菌用 4.4 动力—硝酸盐培养基 --无鞭毛，不运动； 还原硝酸盐为亚硝酸盐 学习文档 4.5 含铁牛奶培养基 /course/ fsc/441/resulex10.html --发酵牛奶中的乳糖，产酸，使牛奶凝固，同时大量产气，凝块碎裂， 即所谓‘‘暴风雨式发酵”/“暴烈发酵”，这是本菌的 重要生化特征之一，也是鉴别的主要指标。 观察2h，5h不发酵为阴性 学习文档 4.6 卵黄琼脂培养基 －－卵磷脂酶阳性，菌落底部及其周围形成乳白色的浑浊带；脂肪酶阴性，菌落表面不形成珍珠样光泽。 4.7 0.1％ 蛋白胨水稀释剂； 4.8 硝酸盐还原试剂:甲萘胺液和对氨基苯磺酸液：在弱酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化，再与α－萘胺偶合形成紫红色。 4.9 革兰氏染色液。 www.pouch-hcho.co.jp/ japanese/virus23.html 肉毒梭菌 对比 学习文档 5、检验程序 计数30～300个 菌落的稀释倍数 活菌计数培养 亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂 学习文档 检验程序—续 36℃，18～24h 36℃，24h ＋ 46℃,2～5h 爆发酵 无 卵磷脂酶阳性 FT：液体硫乙醇酸盐培养基 100 × 0.7 × 104 ＝ 7× 105(个)/g(ml) 学习文档 6、说明 1．活菌计数培养 ：1：10稀释的样品用蛋白胨水依次 稀释至10-2－10-6倍，取1ml放入2个平板，分别加 15ml SPS琼脂，于36℃培养24h，选取长有30—300 个黑色菌落的平板，计数黑色菌落数。 /course/ fsc/441/resulex10.html 学习文档 2、证实试验 (1)纯培养：由平板上任取10个黑色菌落，分别接种 FT培养基，于(36±1)℃培养18－24h，大量繁殖。 (2)菌体形态和染色检验：用培养液涂片，革兰氏 染色镜检。产气荚膜梭菌为革兰氏阳性 粗大杆菌，其耐热株有卵形芽孢，位于 菌体中央或近端。 学习文档 /shouyiweishengwu/图片资料/产气荚膜梭菌.jpg /i?ct=503316480z=845940101tn=baiduimagedetailword=产气荚膜梭菌in=6 学习文档 (3)检查动力和硝酸盐还原实验：－、＋ 用接种环(针)穿刺接种动力—硝酸盐培养基，于(36 ±1)℃培养24h. --判断有无动力--产气荚膜梭菌无动力； --滴加硝酸盐还原试剂“甲萘胺液和对氨基苯磺酸液”各0.5 ml，观察硝酸盐是否被还原--产气荚膜梭菌，能将硝酸盐还原为亚硝酸盐。 ＋ 在弱酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化，再与α－萘胺偶合形成紫红色染料 学习文档 (4)牛乳乳糖发酵产气“暴发酵”试验： 取生长旺盛的FT培养 液1ml接种于含铁牛乳培养基，在46℃水浴中培养 2h后观察有无“暴发酵”现象。5h内不发酵者为阴性。 －－产气荚膜梭菌发酵乳糖，产酸凝固酪蛋白并大 量产气，呈“暴风雨式发酵”现象。 学习文档 (5)卵磷脂酶检查试验 ＋ 用接种环取FT培养液点种于卵黄琼脂平板(每块平板 至少可接种10