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胶体金技术简介 2 胶体金技术的起源 1971年,Faulk 和Taytor在做免疫金电镜实验时引入 胶体金：是一种分散相颗粒在1～100nm之间的分散体系，外观透明不浑浊，在普通显微镜下看不见；颜色为红色,指示剂 胶体金复合物（conjugate）:与抗体连接 3 胶体金技术的发展 80年代：第一代产品，免疫渗滤法 (Flow Through) 90年代：第二代产品，免疫层析法（Lateral Flow）,女性妊娠 HCG 21世纪：快速诊断方法适应市场需要，胶体金技术进入快速发展期，成为IVD的热点（传染病、毒品、食品安全、畜牧兽医等领域） 4 两种技术的比较 5 免疫层析法技术优势:简单/现场/快速 1.打开包装取出试纸条 2.直接插入待测样品中 3. 目测读出结果（3-10分钟内） 6 免疫层析法与常规诊断方法比较 优点 缺点 快速：全部检测过程仅需 3-10分钟 简便：不需其它任何仪器设备，操作简单，无需专业人员，携带方便，可随时随地进行。适合基层单位粗筛使用 廉价：单个测试条成本极低 可单人份检测：对标本既能成批检测，又可单份检测，可立刻拿到结果，不必等待 稳定性好：金标试剂稳定，可长期室温保存 检测标本种类多：既可用于测血清/血浆/全血，又可用于测尿或唾液,或处理后的组织等固体样品 定量问题 灵敏度问题（ng级） 固体样品处理 7 免疫层析法应用领域 类别 应用领域 检测的物质 人类医学 各级医院,血站,CDC,防疫站,诊断中心；家庭自检；商检系统；边检口岸；公安系统. 女性妊娠（hCG,LH等) 传染病（乙肝五项、艾滋,、梅毒、流感等） 肿瘤标志物（AFP、、粪便血红蛋白等） 心梗系列(肌钙蛋白、肌红蛋白、肌酸激酶） 毒品（吗啡,K粉,摇头丸,冰毒等） 农牧业 畜牧兽医站, 商检系统,边检口岸,农牧类院系和研究所 传染病（禽流感、兽瘟疫等） 病毒（烟草花叶病毒、犬细小病毒等） 环境 环保监测部门,研究机构 有害物质超标 食品安全 食品安全检测中心,各监管部门 农兽药残留（磺胺类、瘦肉精等）、大肠杆菌、黄曲霉素 8 免疫层析法试纸条结构 测试线 （T线） 质控线（C线） 胶体金垫 吸水滤纸 样品垫 NC膜（硝酸纤维素膜） 层析方向 PVC底板 9 免疫层析法原理视频 10 免疫层析法检测原理分类介绍（双抗体夹心法） （以大分子HCG检测为例） 11 免疫层析法检测原理分类介绍（竞争法） （以小分子吗啡检测为例） 12 免疫层析法检测原理分类介绍（间接法，标记proteinA） （以HIV抗体检测为例） 13 免疫层析法检测原理分类介绍（双抗原夹心法，标记抗原） 同上，测抗体 14 技术流程 15 平台准备与技术分项 材料准备: 样品垫、胶体金垫、NC膜、吸水纸 试剂准备:免疫试剂如抗原抗体等生物活性原料；生化试剂如氯金酸、柠檬酸三纳、氯化纳、Tween20、BSA等 仪器准备：常规仪器pH计、加热平台、冷冻离心机等；专用仪器喷膜仪、切条机等 胶体金标记技术 NC膜与溶液喷点 胶体金垫与溶液喷点 干燥方法 16 抗体 Antibody 来源差异: 鼠抗,兔抗和羊抗 种类差异: 单抗,多抗 腹水的处理: 饱和硫酸铵沉淀法 特异性:亲和层析柱 溶解液:不含盐,例如PB 抗原抗体生物原料优质的原料是优质产品的保证 抗原 Antigen 天然抗原,重组抗原,合成抗原 偶联抗原物质: BSA, OVA等 17 胶体金标记技术 容器清洁或硅化处理 胶体金颗粒制备 (负电) 颜色与颗粒的关系. 最佳标记颗粒大小40nm. 蛋白质最适用量测定:盐析法 18 NC膜与溶液喷点-NC膜 NC膜的性能 NC膜的选择 爬速对灵敏度的影响 底衬的作用 不同膜厂家的产品差异(Pall/Whatman/Millipore/Sartorius) 19 NC膜与溶液喷点---溶液喷点  C\T线溶液前处理: 1.过滤,0.2um孔径滤膜 2.离心1万转10分钟 喷点过程 头尾去除,喷点中的报废标志 C\T线喷点工艺(BJQ3000喷头)与接触划线(FL1000喷头)工艺比较 20 胶体金垫与溶液喷点 胶体金垫 1.材料选择 2.糖的作用 3.缓冲溶液的作用 喷点法与浸泡法的比较(AJQ3000喷头) 1.释放快慢 2.液体量不同，干燥快慢，边缘效应 3.生产方便性 21 样品垫 材料选择 各成分的作用 1.缓冲溶液的作用 (PH) 2.盐的作用 3.大分子蛋白BSA\PVP 4.表面活性剂 Tween-20,TritonX-100 22 吸水纸 吸水效率 进口与国产纸的差异 23 粘性底板 原理作用 供应商的选择 对NC膜的影响 24 干燥方法 干燥方法的比较 1.冷冻干燥法 2. 烘箱 3.烘房 温湿度的控制 1.