研发部岗前培训细胞培养.pptx

研发部岗前培训; 牛血清 细胞培养技术 ;中文名称： 胎牛血清 英文名称： fetal calf serum 定义： 采自胎牛的血清。含有多种生长因子，常用于体外细胞培养。;血清的主要成分;功能;胎牛血清与小牛血清不同点;3、最为重要的一点是：胎牛本身生活在一个洁净环境当中，其血清与外界隔绝，只要生产工艺科学规范，其质量肯定要比后两者好。 4、根据牛出生时间和血清采制分离方法分为：（1）胎牛血清：八月龄胎牛心脏穿刺取血;（2）新生牛血清：出生12-24小时新生牛静脉采血;又可细分为：a.高级新生牛血清：采血后静置自然析出的血清;b.标准新生牛血清：c.经离心分离的血清;d.普通新生牛血清：融血或微融血的血清;（3）小牛血清：出生三月龄小牛动脉采血分离血清; 血清是血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。对血清的成分和作用的研究虽有很大进展，但仍存在一些问题。 胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。 ;一、细胞培养(cell culture)的定义;IN VITRO:（离体的，即在容器中）用培养细胞进行的实验 IN VIVO:（在体的）完整机体内进行的实验 ;二、细胞培养的优点与不足 （一）优点：;便于使用各种技术：相差显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、组织化学、同位素标记等 易于使用物理、化学和生物因素等进行研究 提供大量生物性状相似的实验对象，更经济;（二）不足：;三、培养细胞的形态分类 （一）贴附型;（二）悬浮型;（三）细胞冻存与复苏;五、培养细胞的生存环境（一）无污染环境;（二）温度;四、细胞培养的基本技术（一）细胞分离与原代培养;细胞分离与原代培养;（二）细胞的传代（secondary culture）;细胞系（cell line）： 在细胞培养中产???了具有无限增殖能力的变种细胞，这种细胞可被无限的传代 常见的细胞系： NIH3T3细胞系：取自小鼠胚胎细胞建立(1963年) Hela细胞系：取自人宫颈癌细胞建立(1952年) ;贴附型细胞的生长过程; 游离期： 细胞接种后在培养液中呈悬浮状态。也称悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形 10分钟 ～ 4小时 ; 贴壁期： 细胞附着于底物上，游离期结束。细胞株平均在10分钟 ～ 4小时贴壁 底物：胶原、玻璃、塑料、其它细胞等 血清中有促使细胞贴壁的冷析球蛋白和纤粘素、胶原等糖蛋白（生长基质），这些带正电荷的糖蛋白的促贴壁因子先吸附于底物上，悬浮细胞再与吸附有促贴壁因子的附着 进口塑料培养瓶涂有生长基质（化学合成的功能基团）;细胞贴壁过程;细胞贴壁过程; 潜伏期： 此时细胞有生长活动，但是无细胞分裂。细胞株潜伏期一般为6～24小时 对数生长期： 细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行实验研究 ; 停止期（平台期）： 细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂 机制：接触抑制、密度依赖性 ;细胞的生长过程;（三）气体环境与pH值;（四）体外培养细胞生存所需基本物质; 2. 氨基酸; 3. 促生长因子; 4. 其它物质;（五）渗透压;（六）培养基;（七）附着底物;（3）微载体：由聚苯乙烯和聚丙烯酰胺制成的小球 体，附着面大，利于大量繁殖细胞 （4）饲细胞（Feeder Cells）：也称滋养细胞，如 用成纤维细胞长成单层后，大剂量射 线照射，细胞失去增殖能力但尚存活 并有代谢活动；再将其它细胞接种于 其上。饲细胞的代谢产物利于其它细 胞生长;（八）抑制细胞生长因素;六、细胞培养的设施与基本条件;压力蒸汽消毒器：湿热消毒，用途广 电热干燥箱：干热消毒（160 ℃ ，2小时）。主要用干玻璃器皿消毒 滤 器：过滤除菌，大多数培养用液，如人工合成培养基、血清、酶液等均采用滤过法除菌 超净工作台：为细胞操作提供无菌环境 紫外灯：紫外线消毒。主要用于培养室空气、操作台、塑料培养皿和培养板等表面消毒;超净台;CO2培养箱;纯水仪;七、器械;八、培养器皿（一）玻璃瓶皿;（二）塑料瓶皿;九、培养基（液）; 天然培养基：